目的 探討對常規體外受精(IVF)周期受精*失敗患者，于受精后18～20 h行補救卵胞漿內單精子注射 (ICSI)的臨床價值。方法 2004年1月至2009年12月我院生殖中心常規IVF受精*失敗周期44例，于受精后18～20 h行補救ICSI。解凍復蘇補救ICSI受精卵的胚胎，共移植2個周期。

    結果 在44例常規IVF*未受精周期中，獲卵374個，補救ICSI 的MII卵201個，正常受精的MII卵127個，獲48個胚胎，7例臨床妊娠，健康新生兒7名，1例單胎妊娠繼續妊娠中，胎兒情況良好。解凍復蘇補救ICSI受精卵2周期，結果1例妊娠，單胎，于孕早期流產。ELISA試劑盒

    結論 對常規IVF受精*失敗周期，于受精后18～20 h行補救ICSI可作為常規IVF受精失敗的有效補救措施。

【關鍵詞】  體外受精;受精失敗;卵胞漿內單精子注射;妊娠率

    常規體外受精胚胎移植周期中，由于卵母細胞和精子內在的結構和功能缺陷、精卵結合障礙、卵膜融合等過程存在問題，常有一些周期存在受精*失敗的情況，具體原因在每一個受精失敗周期中是不同的。近年來有報道在常規體外受精(IVF)失敗后行卵胞漿內單精子注射(ICSI) 補救，有獲得可移植胚胎可能，可以獲得妊娠，可減少取消周期比例。為了避免取消此次常規IVF治療周期，爭取為患者獲得一次受孕的機會，我中心采取了對常規IVF中*受精失敗的卵母細胞，在受精后18～20 h實施ICSI補救，對常規IVF*受精失敗進行彌補。

    本文回顧性分析我院生殖中心2004年1月至2009年12月對常規IVF周期受精*失敗的44個周期, 于受精后18～20h行補救ICSI，作為一種常規的治療選擇，獲得臨床妊娠，取得良好效果，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 資料來源

    于2004年1月至2009年12月在我中心實施IVFET治療的周期中，選擇44個*受精失敗的常規IVF治療周期，于受精后18～20 h將未受精的卵實施補救ICSI。其中常規受精*失敗后行補救ICSI共44個周期，其新鮮胚胎移植周期共31個，解凍補救ICSI受精卵胚胎，共移植2個周期。不孕病因包括雙側輸卵管阻塞29例，子宮內膜異位癥7例，男方少弱精子癥8例。

1.2 方法

    1.2.1 超排卵方案 采用控制性超排卵(COH)方法，常規長方案或短方案[1]，使用藥物為達菲林(Diphereline,益普生,天津)，注射用重組人促卵泡激素(GonalF,雪蘭諾,瑞士)，注射用尿促卵泡激素(麗申寶，麗珠集團)注射用尿促性素(樂寶得，麗珠集團)，注射用絨促性素(HCG，麗珠集團)或(Profasi 雪蘭諾,瑞士)。

    1.2.2 取卵 卵泡充分生長發育至成熟(超聲實時顯像見雙卵巢內有1個以上卵泡直徑> 18 mm或2個以上卵泡直徑17 mm) 時，當天晚上注射HCG 10 000 IU或Profasi 250 μg,注射后的36～37 h，行經陰道B 超引導下取卵術回收卵母細胞。

     1.2.3 卵母細胞的處理 于常規IVF精卵相遇后16～18 h，機械法去除顆粒細胞，在倒置顯微鏡(×400)下觀察受精情況。對受精*失敗患者經患者同意后，立即使用取卵當日處理好的精子對MII期卵母細胞行補救ICSI。

     1.2.4 精液處理 采用密度梯度離心法制備精子，調整精子密度為(5～8)×105/mL。

     1.2.5 補救ICSI后觀察 補救ICSI后18～20 h觀察受精情況，選取含雙原核及第二極體的正常受精卵繼續培養24 h，選擇胚胎(補救ICSI后48h觀察受精卵分裂的情況，卵裂速度正常、卵裂球大小均一或大致均一、卵裂球數目均等或大致均等、碎片≤20% 、胞漿飽滿、質地均勻或大致均勻的胚胎定為胚胎。)2～3個進行宮腔內移植。ELISA試劑盒

     1.2.6 臨床妊娠證實 患者于取卵后開始黃體功能支持，于胚胎移植后14～16 d留晨尿測尿HCG，陽性者移植后4周行B超檢查，B超見妊娠囊和胚胎原始胎心搏動者診斷為臨床妊娠。

2 結果

     常規IVF治療周期*受精失敗44個周期，共獲卵374個，可注射補救ICSI 的MII卵201個，正常受精的MII卵127個，受精率63.18%，83個正常受精的胚胎發生分裂，卵裂率65.35%，48個胚胎，胚胎率為57.83%，31個新鮮移植周期中共有7例臨床妊娠(見表1)，妊娠率22.58%，包括4例單胎妊娠和3例雙胎妊娠，1例孕早期流產，其中1例雙胎妊娠于妊娠中期自然減一胎，健康新生兒7名。1例單胎妊娠繼續妊娠中，胎兒情況良好。解凍補救ICSI受精卵胚胎，共移植2個周期中妊娠1例，系單胎，于孕早期流產　表1 7例妊娠患者基本情況

3 討論

    目前有報道稱IVF 周期中受精*失敗的發生率約10%～20%[2]。常規IVF失敗的原因可能來源于卵母細胞也可能來源于精子，zui終導致卵子受精*失敗的原因是精卵不能識別或識別失敗，精子因素有精子頂體功能缺陷，精子誘發頂體反應功能障礙，造成精子難以穿透卵子的透明帶、精卵融合障礙;精子受體外處理時精子密度、活動力、精子形態異常等，使精子不能順利進人卵細胞，導致受精失敗。     卵子因素有卵母細胞的透明帶增厚、堅硬;卵子胞漿線粒體數量減少以及功能障礙;超排卵方案后體內激素水平改變使卵母細胞胞質與細胞核的成熟不同步及取卵時間不合適，卵母細胞不成熟，精卵原核形成不同步，都可能影響卵母細胞的正常受精過程;卵母細胞透明帶上缺乏相應的精子結合受體，造成精卵結合障礙，導致不能受精;卵子缺乏卵母細胞結合蛋白，至精子不能順利進入卵母細胞。

    補救ICSI 的受精率與卵母細胞的卵齡有著直接的關系[3]。卵母細胞長時間暴露于培養液內，毒性物質接觸時間增加導致卵母細胞內遺傳物質發生異常的概率會增加，染色體異常的幾率也增加[4]。本研究44個補救ICSI周期受精率為63.18%，可能與補救ICSI時間較早有關，大約取卵后18～20h。我們的經驗是于常規IVF精卵相遇后16～18 h，機械法去除顆粒細胞，在倒置顯微鏡(×400)下觀察受精情況。若發現*受精失敗，立即放下所有工作，經患者同意后，立即使用取卵當日處理好的精子對MII期卵母細胞行補救ICSI。

    如何預防和避免常規IVF周期受精失敗，目前還沒有一個非常有效的方法。有學者因為補救ICSI后妊娠率低而并不推薦ICSI作為常規體外受精失敗后的補救措施[5]。雖然已有補救性ICSI的胚胎獲得健康后代的報道[6]，但補救性ICSI 后的受精率、胚胎率和妊娠率均顯著低，臨床上常規應用的意義不大[7-8]。

    本研究44個補救ICSI周期行補救性ICSI受精率63.18%，卵裂率65.35%，胚胎率為57.83%，妊娠率19.44%，我們認為補救性ICSI的治療方案有獲得可移植胚胎可能，可以獲得妊娠，可減少取消周期比例，對于補救性ICSI的臨床應用價值評價，應結合患者卵泡數，可供行補救ICSI 的卵母細胞數，卵母細胞的成熟度，在此基礎上得到患者同意后選擇恰當的時機行補救ICSI，有獲得妊娠和分娩可能，而對于卵母細胞數目較少的受精*失敗的周期來說，該方案的可行性值得考慮。

    本文分析發現常規IVF治療周期*受精失敗44個周期中，31個新鮮移植周期中共有7例臨床妊娠，包括4例單胎和3例雙胎。1例孕早期流產，6例已足月產，1例順產，5例剖宮產，健康嬰兒7名，1例繼續妊娠中，胎兒情況良好，2個解凍補救ICSI受精卵胚胎周期中妊娠1例，于孕早期流產。

    說明補救ICSI可在一定的程度上增加患者受孕的可能性，尤其在患者體外受精*失敗無胚胎可移植的情況下，這種補救ICSI措施可作為一種挽救方案，其無論對患者說對醫生都是非常有價值的。若補救ICSI后未獲得妊娠，也可在補救ICSI后觀察患者的受精和卵裂情況，為患者下一周期的治療方案提供有效的參考價值。因此，補救ICSI不失為一種挽救IVF受精失敗周期的有效方法。ELISA試劑盒