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混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗步驟

來源:上海雅吉生物科技有限公司   2016年04月05日 12:55  

混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗步驟1.  刺激細胞的準備
 
常用的刺激細胞有EB病毒轉化的B淋巴細胞(如N23細胞)或PBMC。
 
(1)取處于對數(shù)生長期的N23細胞,離心后重懸于新鮮*培養(yǎng)基中。
 
(2)調整細胞數(shù)為1×106 /ml~2×106 /ml,移置于塑料培養(yǎng)瓶或者50 ml 離心管中。
 
(3)用60 ℃照射3000 rad。
 
混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗步驟2.  反應細胞的準備
 
分離純化待檢個體的PBMC。
 
3.  LC
 
(1)按2×106PBMC與1×105經(jīng)3000 rad照射的N23細胞的比例,重懸于4 ml 10%FCSRPMI1640。
 
(2)放置于小培養(yǎng)瓶中進行MLC,培養(yǎng)瓶保持直立,培養(yǎng)4 d 內不要晃動。
 
(3)第5 d 加入1 ml 新鮮培養(yǎng)基。
 
4.  如要測定3H-TdR摻入率,一般可在MLC的第5 d 進行。
 
5.  如要檢測MLC中NK、LAK或特異性殺傷性T淋巴細胞(CTL),一般在7~10 d 左右收獲效應細胞。
混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗步驟

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