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藥物半數致死量LD50的測定實驗2022/04/30

實驗方法原理藥物半數致死量LD50是指藥物急性毒性實驗中，當動物死亡率為50%時的單次給藥劑量，單位通常為mg/kg。例如，當某藥物給予400mg劑量時，可致使一半家兔（體重約為4kg）死亡，則其LD50值為100mg/kg。LD50值通常反映藥物急性毒性的大小。藥物的急性毒性、慢性毒性實驗同屬于一般毒理學的研究范疇。此外，藥物毒理學研究尚包括特殊毒理學（致癌、致畸、致突變）、藥物依賴性及過敏反應實驗等。各種屬動物均可用于藥物LD50值的測定，通常使用嚙齒類動物（大鼠和小鼠），有時使用家兔和犬。

實驗性胃潰瘍模型的建立與防治2022/04/30

【實驗目的】1.學習大鼠胃潰瘍(gastriculcer)模型建立的方法。2．觀察藥物對實驗性胃潰瘍的防治作用。3．了解組織切片和HE染色方法?！緦嶒炘怼肯詽?pepticulcer)是由多種因素引起的一種常見病。正常情況下，機體有胃黏液、胃黏膜屏障（mucosalbarrier）、黏膜細胞更新以及胃、十二指腸節律性運動功能等一系列保護性機理，使胃、腸黏膜不受損傷。但過度的精神緊張、情緒激動，會使神經系統和內分泌功能紊亂；飲食失調，如粗糙食物，骨刺等對黏膜的物理性損害；刺激性食物，如過酸

實時熒光定量PCRrealtime PCR2022/04/30

實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒RNA提取試劑盒熒光定量PCRMixTRIZOLdNTP氯仿逆轉錄酶MMLV異丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2瓊脂糖溴化乙錠MOPS甲醛乙酸鈉EDTAEB溴酚蘭儀器、耗材離心管離心機風光光度計電泳槽凝膠板RealtimePCR儀一、樣品RNA的抽提1.取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。2.兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離

ELISA 實驗常見問題解析2022/04/23

ELISA實驗因靈敏度高，特異性強在生物科研上得到了廣泛的認可，但對初學者而言，如不注意實驗操作過程中的各個環節，可能會對最終的實驗結果產生比較大的影響，比如實驗出現白板，顯色弱靈敏度低，花板無梯度背景高等現象。下面對以上實驗現象進行一一解析。1.白板現象在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中所有孔的顏色均為無色，即無信號呈現。出現該現象的可能原因：試劑已過保質期，不同批次稀釋液交叉使用。錯加漏加檢測A，檢測B或者底物溶液TMB。洗板或者加樣過程中，酶標記物被污染失活，稀釋液中含有

吉姆薩染色實驗2022/04/23

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲著色較好，結構顯示更清晰，而胞質和中性顆粒則著色較差。基本方案實驗材料原位雜交玻片試劑、試劑盒吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯儀器、耗材染色盤培養箱濾紙實驗步驟1.將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。（1）1個盤：pH6.810mmol/l磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。（2）3個盤：水。（3）脫水系列溶液：①3個盤：分別盛50%、70%和95%乙醇。②2個盤：盛有100%乙醇。③3個

蛋白質檢測2022/04/23

蛋白提取組織樣本總蛋白提取（小鼠肝組織）1、頸椎脫臼處死小鼠，75%乙醇擦拭皮膚，剪開腹腔，剪切肝臟組織。2、平皿中放入6ml預冷0.9%NaCL。3、稱取0.6g左右肝組織，在平皿中剪碎組織，并轉移到勻漿器。4、預冷裂解液中添加PMSF（20ug/2ml）。5、取2ml預冷裂解緩沖液，迅速加入勻漿器，冰浴條件下充分研磨。6、組織研磨液轉移至1.5ml離心管。7、4℃，15000rpm，離心10min。8、取上清組織蛋白粗提取液至新的1.5ml離心管。9、進行蛋白定量，-80℃保存。蛋白提取組織

細胞免疫組化2022/04/23

1.對于貼壁細胞或細胞涂片PBS洗滌一次。2.如果細胞貼得不牢，可以干燥樣品使細胞貼得更牢。3.用4%多聚甲醛固定細胞15分鐘，用PBS洗滌一次。4.將切片移入濕盒中加入新鮮配制的3%雙氧水,以去除內源性過氧化物酶封閉液，室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗；5.滴加正常山羊血清封閉液，室溫30分鐘，甩去多余液體；6.滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃過夜），然后PBS充分淋洗；7.滴加兔/鼠二抗工作液，室溫孵育1h，PBS充分淋洗；8.DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度；9.PBS

western blot 之發光鑒定2022/04/23

一般使用辣根過氧化物酶HRP-ECL發光法或堿性磷酸酶AP-NBT/BICP顯色法。1．HRP-ECL發光法：將A、B發光液按比例稀釋混合。膜用去離子水稍加漂洗，濾紙貼角吸干，反貼法覆于A、B混合液滴上，熄燈至可見淡綠色熒光條帶（5min左右）后濾紙貼角吸干，置于保鮮膜內固定于片盒中，迅速蓋上膠片，關閉膠盒，根據所見熒光強度曝光。取出膠片立即*浸入顯影液中1～2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片*定影，清水沖凈晾干，標定Marker，進行分析與掃描。2．AP-NBT/BICP顯色法：每片N

楊梅苷對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用2022/04/17

目的：研究楊梅苷對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用及其機制。方法：60只SD大鼠隨機分為6組:正常對照組、模型組、陽性給藥組(維拉帕米100μg/L)和楊梅苷低中高劑量組(2.5,5,10mg/L),每組10只。釆用Langendorff離體心臟灌流技術,停灌30min,再灌45min,造成心肌缺血再灌注損傷模型。記錄楊梅苷對心臟血流動力學指標的影響,測定冠脈流出液中心肌三酶LDH、CK、AST的水平,心肌組織中抗氧化酶SOD、CAT的活性及脂質過氧化物MDA的含量。HE染色觀察心肌組織病理

辛伐他汀不同干預方案對骨質疏松大鼠骨質量的影響2022/04/17

目的：探討和比較不同干預方案下辛伐他汀對去卵巢大鼠骨丟失和骨質量下降的干預效果。方法：3月齡雌性SD大鼠32只,隨機分為4組,每組8只:假手術(A)組、卵巢切除(B)組、卵巢切除加辛伐他汀前半程干預組(C)和后半程干預組(D)。除A組接受假手術外,其余各組大鼠行雙側卵巢切除術,C組于術后給予辛伐他汀(5mg/kg/d)干預10周后停藥,D組于術后10周開始接受辛伐他汀干預。術后20周處死所有大鼠,采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測血清I型前膠原氨基端前肽(PINP)、I型膠原羧基端交聯端肽

心肌球源性心肌干細胞聯合心室肌細胞外基質治療大鼠急性心肌梗死效果2022/04/17

目的：擬研究心室肌細胞外基質能否促進植入心肌梗死心肌組織內的心肌球源性心肌干細胞（CDC）向心肌細胞，血管內皮及血管平滑肌細胞分化，改善大鼠心肌梗死后的心臟結構及功能。方法：心肌組織塊培養法培養CDC，脫細胞法配置ECM，結扎Wistar大鼠前降支建立急性心肌梗死模型。分別向心肌梗死心肌組織內注入IMDM（I組），ECM懸液（E組），含106CDCs的IMDM溶液（IC組），含106CDCs的ECM懸液（EC組），每組心肌梗死大鼠6只。3周后心臟彩超評估心臟功能，Masson染色分析心肌纖維化陽

觀察運輸對新西蘭兔血液常規和生化指標的影響。2022/04/15

目的：觀察公路運輸對新西蘭兔血液常規和生化指標的影響。方法：選用12只健康普通級新西蘭兔進行2h公路運輸，分別在運輸前，運輸后0、24、48、72、96h采集血液獲得檢測樣本。通過血液分析儀檢測血常規指標：白細胞（WBC）、紅細胞（RBC）、血紅蛋白量（HGB）、紅細胞壓積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板（PLT）。通過全自動生化分析儀檢測：肝功能指標：丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、白蛋白（ALB）、總蛋白（T

不同階段幼齡SD大鼠血液指標差異的探討2022/04/15

目的本研究旨在采集不同發育階段幼齡SD大鼠的血液指標，建立相應的背景數據，為開展兒科藥物安全性評價提供參考。方法分別收集3、6、8、12和16周齡共計約200余只幼齡SD大鼠的血樣，采用全自動血球計數儀、生化分析儀、測定相應指標。結果從各指標參數結果看，6周齡組大鼠的血液指標與16周齡大鼠相比RBC、HGB、TP、BUN等大部分指標存在一定差別，12周齡組大鼠的血液指標與16周齡大鼠相比WBC、HGB、BUN等大部分指標無差異。結論結果表明不同周齡階段的幼齡SD大鼠的血液指標具有一定的時間相關性

小鼠慢性肝損傷周期性病變研究2022/04/15

目的研究四氧化碳（CCL4）誘導的小鼠慢性肝病模型肝損傷變化特征，并探討其在醫學研究中的應用。方法正常BALB/c小鼠常規飼養1周后，腹腔注射0.5%CCL4溶液（10μL/g，1次/3天，持續10周）。注射第2、4、6、8、10周后，取小鼠血清檢測ALT、AST，同時取肝臟固定后進行HE、Masson染色，觀察小鼠肝臟損傷變化。結果CCL4溶液注射2周時，肝細胞損傷以變性為主，出現大量炎性細胞浸潤和少量膠原蛋白沉積，ALT、AST輕度升高;4周時，肝細胞損傷以壞死為主（P結論低劑量CCL4誘導

腦卒中后抑郁癥模型2022/03/25

動物：雄性SD大鼠，體重210–250g建模：MCAO（大腦中動脈阻塞）+CMS（慢性溫和性刺激）1.先做MCAO模型，參照大鼠腦梗模型；2.9種不同的應激源，連續18天的晝夜隨機順序如下：食物和水剝奪（20小時，然后進行蔗糖偏好試驗）、水分剝奪（18小時，然后1小時面對空瓶子），45?保持架傾斜（17小時），通宵照明（燈亮共36小時）、污籠（200毫升水，100克鋸屑墊層，21小時），在4?C水中游泳（5分鐘）、足部電擊（持續時間為每分鐘5秒，持續30分鐘）、夾尾（1分鐘）、成對關在籠中（2小

更年期抑郁癥模型2022/03/25

大鼠適應環境2周后，開始卵巢摘除術1.大鼠常規麻醉，固定。2.卵巢摘除術：7周雌性Wistar大鼠（200-220g）于最末肋骨下，腋中線和距脊柱外側2cm交叉處剪除長毛，常規消毒后，切開皮膚和背肌，用眼科鑷夾卵巢，分離脂肪團，結扎血管，切除卵巢，縫合肌層和皮膚。3.術后回復2周。4.慢性不可預知性溫和刺激(CUMS)：在11種壓力源中，每天使用兩種，持續6周。按隨機順序：連續通宵照明（12小時），間歇性照明（燈亮1小時和熄滅1小時；3小時），成對籠（每個籠中2-3只動物；3小時），空籠飼養（1

小鼠EAE模型制備2022/03/18

適應性喂養實驗小鼠自購回后保持其自由飲水、進食,溫度23-25°C,動物房12h-12h晝夜交替,適應性喂養-周后進入實驗。EAE造模實驗鼠稱重,腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉(0.5m/100g),背部備皮,酒精棉球消毒后各小鼠分別于背部中線兩側皮下4點注射抗原乳劑(MOG35-55)0.2ml.免疫當天(第0d)及48h(第2d)分別給模型各組小鼠腹腔注射PTX每只500ng(0.2ml)。誘導小鼠產生EAE。模型評價:抑郁模型可用于抗抑郁藥物的篩選及抑郁病理生理機制的研究因其采用的刺激因子類

裸鼠成瘤模型2022/03/18

動物適應性喂養動物房12h~12h晝夜交替,保持動物自由飲水、進食,保持室溫23~25C,-周后進入實驗。裸鼠皮下接種對接種環境消毒,用注射器進行細胞重懸,酒精棉球對裸鼠注射部位消毒后,取對數生長期的細胞,制成濃度為1x107/ml的細胞懸液,按照分組進行接種，織裸鼠于右腋皮下緩慢接種150μl細胞懸液。拔針后迅速用針頭將細胞聚集,防止細胞液外漏。成瘤觀察與測量皮下接種后,每天觀察裸鼠健康狀態及腫瘤生長情況;待成瘤后,每2天測量腫瘤長徑與短徑并計算腫瘤體積(腫瘤體積=0.52x長徑x短徑2)。

脂多糖（LPS）致膿毒血癥急性肺損傷大鼠模型2022/03/11

動物模型名稱：脂多糖（LPS）致膿毒血癥急性肺損傷大鼠模型動物的種屬、品系：SD大鼠動物性別：雄性動物年齡：成年動物體重：160~200g模型制備信息制備環境：屏障環境制備方法：脂多糖（LPS）誘導。用碘伏消毒大鼠腹部皮膚，用棉花擦除碘伏，按10mg/kg體重一次腹腔注射LPS藥液。制備周期：1周判定指標：①炎癥因子含量增加；②肺組織含水量增加；③肺臟組織病理學改變：膿毒癥6小時：肺泡壁毛細血管擴張、充血，肺泡擴張不均勻，部分肺泡萎陷，肺泡壁明顯增厚，間質見多形核細胞浸潤。膿毒癥12小時：肺泡壁

戊四氮點燃小鼠癲癇模型簡介2022/03/04

戊四氮（Pentylenetetrazole，PTZ）是一種高度敏感的化合物，有毒物質；小心處理。1.將2mg/mLPTZ溶解在無菌0.9%（w/v）NaCl中。在使用當天準備PTZ。2.對于野生型C57BL/6小鼠，試驗建議劑量為30-35mg/kg。對PTZ的敏感性取決于使用的小鼠品系，注射劑量因實驗目的而異。3.服用PTZ后觀察動物行為30分鐘，并對異常行為進行分類和評分。如果可能，觀察動物24小時，或注射后至少再觀察6-10小時，特別是在癲癇發作嚴重時得分達到3分或以上。4.每隔一天注射