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肝纖維化動物模型的其他造模方法2022/06/03

肝纖維化動物模型化學(xué)性損傷法：雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射，第1次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。評價:第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細胞變性壞死和炎細胞浸潤，炎細胞浸潤、壞死細胞數(shù)和程度超過豬血清模型。6周后出現(xiàn)增生纖維束，纖維增生晚于和少于豬血清模型。大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多。肝纖維化動物模型四氯化碳法：180～200gWistar或SD大鼠，皮下注射40%-50%CCl4，油溶液(0.3

大鼠肺缺血再灌注模型2022/06/03

肺缺血再灌注損傷是由于機體組織或器官在缺血再灌注后導(dǎo)致肺組織迅速損傷。缺血再灌注可能發(fā)生在肺，也可能是下肢或腹主動脈等，導(dǎo)致肺泡上皮細胞和肺毛細胞血管內(nèi)皮細胞受損。究其原因可能與組織炎癥細胞聚集、氧自由基產(chǎn)生和促炎因子釋放等病理生理反應(yīng)有關(guān)。結(jié)扎法制備肺缺血再灌注損傷模型多，因其操作簡單、成功率高、實用性強，是研究肺缺血再灌注損傷發(fā)病機制和防治保護的關(guān)鍵。制備肺缺血再灌注模型我們選用適齡的SD大鼠，通過結(jié)扎手術(shù)進行造模。

動物實驗檢測水迷宮實驗?zāi)康氖鞘裁?/a>2022/06/03

動物實驗檢測水迷宮實驗?zāi)康氖鞘裁丛卺t(yī)學(xué)界，動物實驗檢測的目的就是要通過對動物本身生命現(xiàn)象的研究，進而推用到人類，探索人類的生命奧秘，控制人類的疾病和衰老，延長人類的壽命。而水迷宮實驗是一種強迫實驗動物（大鼠、小鼠）游泳，學(xué)習(xí)尋找隱藏在水中平臺的一種實驗，主要用于測試實驗動物對空間位置感和方向感（空間定位）的學(xué)習(xí)記憶能力。應(yīng)用于學(xué)習(xí)記憶、老年癡呆、海馬/外海馬研究、智力與衰老、新藥開發(fā)/篩選/評價、藥理學(xué)、毒理學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、動物心理學(xué)及行為生物學(xué)等多個學(xué)科的科學(xué)研究和計算機輔助教學(xué)等領(lǐng)

特殊染色技術(shù)2022/05/23

病理組織切片染色技術(shù)作為病理實驗室基本方法之一，具有較高的使用價值，也是目前臨床外科病理基本、常見的形態(tài)學(xué)檢驗技術(shù)。組織切片染色就是利用染料在組織切片上給予不同顏色，使其與組織或者細胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細胞的各種成分。常見的組織染色是HE染色，另外睦科生物還可開展其他特殊染色項目，如masson染色、PAS染色、AB-PAS染色、EVG染色、VG染色、維多利亞藍染色、番紅-固綠染色、甲苯胺藍染色、油紅O

細胞增殖及活性檢測技術(shù)2022/05/23

細胞增殖是指細胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進行的分裂系列過程。其中核DNA的復(fù)制倍增是整個過程的重要特征。細胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)遺傳學(xué)腫瘤生物學(xué)免疫學(xué)藥理和藥代動力學(xué)等研究領(lǐng)域。檢測細胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測細胞代謝活性兩種，前者主要有Brdu、EDU檢測等，后者主要有MTT、CCK8等檢測，客戶可根據(jù)處理藥物數(shù)量等因素選擇合適的檢測方法。

血管形成實驗技術(shù)2022/05/23

血管形成體外模型可分為細胞水平的增殖實驗、遷移實驗和管腔形成實驗，以及器官水平的人胎盤血管段培養(yǎng)模型和大鼠動脈環(huán)模型。目前通常所說的血管形成實驗是指管腔形成實驗。管腔形成反映毛細血管的早期過程，是體外檢查內(nèi)皮細胞功能最完整的指標(biāo)。血管形成過程中內(nèi)皮細胞會形成細胞條索，然后形成管腔，體外在特定條件下如基質(zhì)膠、膠原等培養(yǎng)時也能形成管腔。藥物通過抑制管腔形成或使形成的管腔斷裂來達到抑制血管形成的作用。借助計算機軟件計算小管數(shù)及小管之間的連接數(shù)及小管的長度和面積，可定量分析藥物對管腔形成的影響。

雙熒光素技術(shù)2022/05/23

熒光素酶報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀（化學(xué)發(fā)光儀）測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。雙熒光素酶體系，即有兩種熒光素酶，比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲

細胞凋亡誘導(dǎo)技術(shù)2022/05/19

【實驗方法與步驟】（1）細胞凋亡的誘導(dǎo)：HeLa細胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數(shù)生長期(見細胞傳代培養(yǎng)）。實驗組細胞加入順鉑溶液（生理鹽水配置）至終濃度為20μmo1/L,37℃，5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)。空白實驗對照加入等體積的生理鹽水，同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。24h后進行染色及形態(tài)學(xué)觀察。（2）胰酶消化細胞，將培養(yǎng)基上清及消化下來的細胞一同轉(zhuǎn)入離心管中600~800r/min離心10min。（3）吸去上清，用1mLPBS重懸細胞沉淀，并轉(zhuǎn)入1.5mL微量離心管中，600~800r/min離心10min。（4

Transwell實驗技術(shù)2022/05/19

微孔濾膜培養(yǎng)小室及雙室聯(lián)合培養(yǎng)系統(tǒng)（Transwell實驗）：應(yīng)用微孔濾膜培養(yǎng)小室，進行膠質(zhì)瘤細胞與內(nèi)皮細胞的聯(lián)合培養(yǎng)，可以更接近體內(nèi)環(huán)境，模擬瘤細胞對血管內(nèi)皮細胞的作用，濾膜上8μm的微孔可允許內(nèi)皮細胞穿過到達膜的下面，這些穿越遷移的內(nèi)皮細胞可粘附于膜的下面，通過計數(shù)濾膜下面的細胞可基本反映細胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱為上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室，上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以膜相隔。將細胞種在上室內(nèi)，由于

活力染色技術(shù)2022/05/19

一、實驗原理各種細胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導(dǎo)致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數(shù)，可采用臺盼藍染料排斥實驗（Phillips1973)。正常的健康細胞能排斥染料，但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內(nèi)。染料排斥實驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法，無法區(qū)別10%~20%的活力差異。除此之外，排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長時問生存或繁殖。二、實驗方法1)胰蛋白酶處理細胞，無菌狀態(tài)下取0.5ml細胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向另一管中無菌加人0.

細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)2022/05/19

一、細胞轉(zhuǎn)染細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類。本實驗室主要是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、miRcroRNA轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染、藥物轉(zhuǎn)染、多肽轉(zhuǎn)染等。二、miRcroRNA轉(zhuǎn)染（一）實驗材料及試劑六孔板、CO2培養(yǎng)箱、EP管、酒精燈等；無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細胞等。（二）實驗內(nèi)容1當(dāng)六孔板中MSC細胞密度達90％時，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染，將無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM取出復(fù)溫并注意平衡好；2

流式細胞術(shù)檢測細胞周期2022/05/19

流式細胞術(shù)檢測細胞周期1。實驗原理用流式細胞儀檢測細胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染細胞核。PI在一定波長的光下發(fā)出熒光，其強度與DNA含量成正比。通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數(shù)，可檢測細胞的增殖、凋亡。2。流式細胞儀檢測A549細胞周期步驟收集對數(shù)生長期細胞，計數(shù)，以(1~5)×105/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液，各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶氨酸的細胞培養(yǎng)液2m

人胃癌高轉(zhuǎn)移模型2022/05/16

人胃癌高轉(zhuǎn)移模型的建立可以：（1）研究腫瘤轉(zhuǎn)移機制；（2）研究腫瘤防治；（3）為腫瘤轉(zhuǎn)移研究提供更為理想的動物模型。腫瘤組織塊原位移植法實驗方法原理用人胃癌組織塊SGC-7901原位移植于SCID小鼠，第4周末移植瘤向淋巴結(jié)和肝臟等器官轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率達66.7%(2/3)，第6周末轉(zhuǎn)移率高達*(10/10)。實驗材料雄性SPF級SCID小鼠人胃癌組織SGC-7901試劑、試劑盒水合氯醛福爾馬林液儀器、耗材飼養(yǎng)籠光學(xué)顯微鏡石蠟實驗步驟一、實驗材料準(zhǔn)備1.雄性SPF級SCID小鼠，6～7周齡，體重20

一般慢性炎癥的基本病理變化2022/05/14

1、炎癥灶內(nèi)主要是巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞浸潤。單核吞噬細胞的浸潤對慢性炎癥十分重要。單核細胞從血管游出后轉(zhuǎn)化為巨噬細胞。巨噬細胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細胞的積聚有三方面的原因：①由于從炎癥灶不斷產(chǎn)生吸引單核細胞的趨化因子，如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質(zhì)及膠原和纖維粘連蛋白的分解產(chǎn)物等。因此，從血液循環(huán)中滲出的單核細胞源源不斷來到局部，這是局部巨噬細胞的主要來源。②游出的巨噬細胞在局部通過有絲分裂而增殖，但巨噬細胞局部增殖的起始動因還不清楚。③炎癥灶內(nèi)的巨噬細胞壽命長，并能長期停留

激光掃描共聚焦顯微鏡操作步驟及注意事項2022/05/14

激光掃描共聚焦顯微鏡可測定的樣品種類很多．包括生物材料、組織(切片)、細胞(亞細胞)結(jié)構(gòu)等。樣品中熒光的來源主要有如下幾種：自發(fā)熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發(fā)熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長均可在儀器自帶軟件的染料信息庫中找到。1．觀察步驟及儀器操作根據(jù)實驗要求制備樣品完畢后。即可進行觀察。基本步驟如下：(1)開啟儀器電

人非小細胞肺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型的建立實驗2022/05/14

人非小細胞肺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型的建立：（1）探討肺癌遠處轉(zhuǎn)移和阻斷其遠處轉(zhuǎn)移的研究；（2）模擬晚期非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的自然發(fā)生過程；（3）在活體動物的完整器官內(nèi)評估瘤細胞播散和腫瘤的生長。實驗方法原理將表達GFP的質(zhì)粒pRNAT-U6/Neo轉(zhuǎn)染人肺腺癌細胞A549，G418篩選獲得穩(wěn)定表達GFP細胞，對比轉(zhuǎn)染前后細胞的生長活性和成瘤性。將轉(zhuǎn)染后細胞原位種植裸鼠預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)處死。HE染色和免疫組化檢測轉(zhuǎn)移灶的位置和數(shù)目。利用KODAKIS2000MM系統(tǒng)檢測腫瘤播散情況。實驗材料BALBcnunu

人胰腺癌裸小鼠模型2022/05/14

人胰腺癌裸小鼠模型實驗方法原理將人胰腺癌細胞株8988接種于裸鼠腋窩處皮下，每周測量腫瘤大小，第42d處死小鼠。腫瘤組織及相關(guān)臟器送病理及電鏡檢查，放射免疫法檢測相關(guān)抗原。皮下腫瘤組織細胞及細胞株培養(yǎng)，HE染色。實驗材料裸小鼠BALBcnu-nu胰腺癌細胞株8988試劑、試劑盒RPMI-1640*培養(yǎng)基胰酶戊二醛儀器、耗材CO2培養(yǎng)箱試管實驗步驟一、實驗材料準(zhǔn)備裸小鼠BALB/cnu-nu，4～6周齡，體重16～20g，雌雄兼?zhèn)洌琒PF級環(huán)境中飼養(yǎng)，恒溫25～27℃，恒濕45%～50%，飲用水及

懸浮細胞的免疫熒光標(biāo)記實驗2022/05/07

免疫熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescencetechnique）是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素，當(dāng)與其相對應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位，檢測出抗原或抗體。實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒多聚-L-賴氨酸儀器、耗材離心機培養(yǎng)箱實驗步驟1.細胞在冰浴中冷卻，然后用臺式離心機于4℃以800g離心5min，吸去培養(yǎng)液并以4℃PBS重懸細胞。2.離心吸去PBS，以1~2ml2%PFA固定液，或2%PFA固定液/

成年小鼠的灌流實驗2022/04/30

進行實驗動物灌流是獲得良好的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果以及保存腦、腎、心臟和其他許多器官所必需的。對于未經(jīng)訓(xùn)練的實驗人員，初次進行灌流可能會失敗，故建議首先用一些對照實驗動物練習(xí)，以熟悉此過程。基本方案實驗材料小鼠試劑、試劑盒PBS儀器、耗材23-G針頭注射管解剖器械實驗步驟1.一支針管吸滿1×PBS，另一支吸4%PFA固定液（4℃），擱置待用。2.在袋中用CO2氣體處死小鼠。停止吸呼后，立刻背朝下放平小鼠，小心剖開胸腔防止過多出血，小心并迅速切開肋骨，剪去橫隔膜，暴露心臟。3.小心將吸有1×PBS的針管刺

實驗動物的取血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)2022/04/30

名稱：實驗動物的取血關(guān)鍵詞：動物,取血,方法目的：規(guī)范實驗動物(家兔、狗，豚鼠)取血的方法和途徑,主體內(nèi)容：（一）家兔1．耳緣靜脈取血法選好耳緣靜脈，拔去被毛，用二甲苯或酒精涂擦局部，小血管夾夾緊耳根部，使血管充血擴張。術(shù)者持粗針頭從耳尖部血管，逆回流方向刺入靜脈內(nèi)取血，或用刀片切開靜脈，血液自動流出，取血后棉球壓迫止血，取血量2～3ml。壓住側(cè)支靜脈，血液更容易流出；取血前耳緣部涂擦液體石蠟，可防止血液凝固。2．耳中央動脈取血法家兔固定箱內(nèi)，用手揉擦耳部，使中央動脈擴張。左手固定兔耳，右手持注