ADC復合物由mAb、Linker和Payload三部分組成 ,故其分子性質較為復雜,需要采用多種分析方法進行表征。

一般需要采用基于分離的技術表征ADC的單體含量、游離和能力,例如:尺寸排阻色譜法(SEC)、反相色譜法(RPC)、疏水相互作用色譜(Hydrophobic interactionchromatography, HIC)等。此外,質譜( Mass Spectroscopy , MS )可用于識別細微的分子結構變化; SEC可用于對揮發(fā)性流動相中的ADC進行脫鹽;在穩(wěn)定性期間還可采用SEC檢測ADC片段.

運用電噴霧電離質譜(ESI-MS)技術可識別基于半胱氨酸偶聯(lián)技術的ADC的分布,其在于可準確地觀察分子離子或準分子子;通過液質聯(lián)用(LCMS)與RPC相結合的方法可確認偶聯(lián)類型和DAR。通常, LCMS技術用于Fc結構域中含有保守N-低聚糖的還原或非還原性ADC的分析,以減少異質性。

RPC和HIC為基于分子疏水性的分離方法中, RPC用于確定負荷、分布和異質性,量化分析ADC混合物中的游離、ADC在不同儲存條件下的穩(wěn)定性以及表征通過重鏈或輕鏈附著到Linker.上的mAb。與RPC類似, HIC是另一種用于表征ADC疏水性的分析技術,DAR較的ADC表現(xiàn)出疏水性,可通過HIC進行表征。

此外,親水性相互作用色譜是-種比反相液相色譜的亞單位水平結合物表征技術,運用LC-MS與HILIC相結合的方法可表征ADC的Payload和聚糖修飾;肽圖分析法(Peptide mapping)是研究特定ADC荷分布的另一種工具,多用于研究蛋白質分子的一級結構和確定蛋白質分子內表面暴露的表位.

法通于去除Fc結構域中的保守N-低聚糖;生物分析測定法用于評估釋放的游離、抗體總量和DAR; ELISA是定量與mAbs相偶聯(lián)的Payload的方法; MS用于測定游離的濃度;基于特定配體的分析方法用于了解ADC的特異性結構,可作為早期篩選技術;電化學發(fā)光技術已用于表征完整ADC分子的結合能力。

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