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血藍蛋白介紹及提取方法

2021-9-3 閱讀(690)

 

血藍蛋白是在某些軟體動物、節肢動物、血淋巴中發現的一種游離的藍色呼吸色素。血藍蛋白含兩個直接連接多肽鏈的銅離子,與含鐵的血紅蛋白類似,它易于氧結合,也易與氧解離,是已知的惟一可與氧可逆結合的銅蛋白,氧化時呈青綠色,還原時呈白色。
分子量450 000~1300 000。節肢動物的血藍蛋白一條多肽鏈與一分子氧結合,含銅量0.17%;軟體動物的血藍蛋白一條多肽鏈則與6分子氧結合,含銅量0.025%。銅以二價形式與蛋白直接結合。血藍蛋白有多種催化作用,特別是變性后,在特定條件下具有多酚氧化酶、過氧化氫酶和脂氧化酶等活性。
無脊椎動物中,多數動物的血液不含血紅蛋白,如軟體動物(以及節肢動物所含的是血藍蛋白(亦稱為血藍素)。
血藍蛋白是節肢動物和軟體動物血淋巴中的含銅呼吸蛋白,脫氧狀態為無色,結合氧狀態為藍色。分子質量一般為50 ku~75 ku,由7個或8個功能單位組成圓柱形結構。組成血藍蛋白的亞單位數目較多,每個亞單位都含有2個Cu(Ⅰ)離子。不同蛋白質所含亞單位數目不同,有些血藍蛋白的分子質量可達9×103 ku。軟體血藍蛋白是圓柱狀分子,含有10個~20個亞單位,每個亞單位(分子質量為350 ku~450 ku)有7個~8個功能單元(氧分子結合部位)。節肢動物血藍蛋白由六聚體或多個六聚體組成,分子質量約為3.5×103 ku,每個亞單位(分子質量為7.5 ku)含有一個氧合中心。血藍蛋白的主要生物學功能與機體內的輸氧有關,它與血紅蛋白和蚯蚓血紅蛋白并稱為動物界中的3種呼吸蛋白。但近年的研究表明,血藍蛋白是一種多功能蛋白,它不僅具有輸氧功能,而且還與能量的貯存、滲透壓的維持及蛻皮過程的調節有關。特別引起學術界重視的是,血藍蛋白還具有酚氧化物酶活性和抗菌功能,被認為是節肢動物和軟體動物中的一種重要的免疫分子。
從河蚌中提取,純化,以及冷凍干燥血藍蛋白的工藝。
1)河蚌樣本在45℃(±5℃)溫水中預處理,剝離甲殼;
2)注射器中加入抗凝劑,抽取心臟血;
3)血液透析后低溫離心,取上清,得到血藍蛋白粗提液
4)依次用凝膠過濾色譜、陰離子交換色譜層析得到高純度血藍蛋白原液
5)將血藍蛋白原液加入保護劑進行凍干,制成凍干品。

 



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