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DAPI染色原理介紹

2022-6-15 閱讀(3331)

DAPI 是一種可以與 DNA 進行強力結合的常用的熒光染料。DAPI 結合至雙鏈 DNA小溝 的AT堿基對位置,一個 DAPI分子 可占據約三個堿基對位置。結合到 雙鏈DNA 上的 DAPI分子 后的熒光強度大約可提高20倍,一般采用熒光顯微鏡進行觀測即可,依據熒光強度可以確定出DNA的量。此外,因 DAPI 可透過完整的細胞膜,也可用于 活細胞 和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡下進行觀察,DAPI染料 是利用紫外光波長的光線進行激發。單獨 DAPI 的最大吸收波長是340nm,DAPI的最大發射波長是488nm;當 DAPI 與 雙鏈DNA 進行結合,DAPI的最大吸收和發射波長分別為:364nm,454nm(10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl,10 mM EDTA),其發散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可與RNA進行結合,但產生的熒光強度只有約為DNA結合的熒光強度的1/5,其發散光的波長范圍約在500nm左右。




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