NobleRyder C9118 Turbo感受態細胞

產品貨號：C9118

產品名稱：Turbo 感受態細胞

產品規格：10*100μl

Turbo感受態細胞 載體構建

產品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder C9118 Turbo 感受態細胞

是采用大腸桿菌Turbo菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。Turbo 菌株是生長最快的大腸桿菌菌株，菌株平板上6.5小時可見克隆，搖菌4-6小時可提取質粒。核酸內切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高質粒DNA的產量和質量。菌株的LacIq基因的表達受到嚴格控制，可克隆毒性基因。ΔlacZM15基因的存在可用于藍白斑篩選。菌株還具有抗T1噬菌體感染的特點。Turbo感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率大于109cfu/μgDNA。

基因型:

F'proA+B+lacIqΔlacZM15/fhuA2Δ(lac-proAB)glnVgalK16galE15R(zgb-210::Tn10)TetSendA1thi-1Δ(hsdSmcrB)5

菌株抗性: 對氨芐qing霉素、氯mei素、卡na霉素、壯觀mei素、鏈mei素、四huan素敏感。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1.將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質粒DNA或5-10μL連接產物到細胞中，用手指撥da管底，輕輕混勻。

2.冰水浴中靜置30分鐘。

3.42℃熱擊60秒鐘，不要晃動。

4.冰水浴中靜置2分鐘。

5.加入500μL 的室溫的SOC或LB培養基。

6.置于37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇培養60分鐘。

7.取 50-100μL 菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃過夜培養。

（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm 離心30秒鐘，棄掉上清，留100μL左右的液體，用200μL 吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μL重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質粒轉化，連接產物轉化最好用涂布法。）

（質粒快速轉化步驟：對于氨芐青mei素抗性的質粒，將步驟2的時間縮短到5分鐘，完成步驟4后，可直接涂布或劃線于含氨芐qing霉素抗性的LB平板上。其它抗性的質粒仍需60分鐘的復蘇培養。）

注意事項：

1．感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2．實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

4．轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量。

5．為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到最di。

Turbo感受態細胞 載體構建 

產品訂購信息：

C9118 Turbo 感受態細胞  10*100μl