NobleRyder C9348 Stbl4感受態細胞

產品貨號：C9348

產品名稱：Stbl4感受態細胞

產品規格：20×100μl

Stbl4感受態細胞 載體構建

產品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder C9348 Stbl4感受態細胞來源于Stbl2 菌株（Stbl2為JM109衍生菌株），用于克隆不穩定序列（如重復序列，逆轉錄病毒序列等）和甲基化的DNA序列，特別適合構建重組逆轉錄病毒或慢病毒質粒?？捎糜诖筚|粒的構建和擴增，適用于構建和擴增質粒 cDNA 文庫。區別于Stbl2 菌株，Stbl4 菌株在 IPTG和X-gal 存在的條件下，可進行α互補原理的藍白斑篩選實驗。感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率大于108cfu/μg。

基因型:

mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)

菌株抗性：對氨芐qing霉素，卡na霉素，壯guan霉素敏感；對四huan素有抗性。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質粒DNA 或5-10μL連接產物到細胞中，用手指撥da管底，輕輕混勻；

2. 冰水浴中放置15-30分鐘，不要晃動；

3. 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動；

4. 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動；

5. 加入500μL無菌的SOC或LB培養基；

6. 置于37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇培養60分鐘；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養12-16小時。

（當克隆不穩定片段時，為了降低重組錯誤率，復蘇培養和涂布培養最好采用 30℃的培養條件，平板在30℃培養時需要24小時左右。）

（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μL吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μL重懸的菌液分多點滴在抗性LB平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。37℃培養過夜。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

注意事項：

1．感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2．實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

4．轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量。

5．為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到最di。

Stbl4感受態細胞 載體構建 

產品訂購信息：

C9348 Stbl4感受態細胞  20×100μl