查爾酮異構酶(Chalcone isomerase, CHI)試劑盒說明書

微量法 100T/96S

查爾酮異構酶試劑盒 抗氧

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

查爾酮異構酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個被認識的黃酮類化合物合成相關酶，也是黃酮代謝途徑中的關鍵酶之一。查爾酮異構酶和查爾酮合酶一起構成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。

測定原理：

查爾酮異構酶（CHI）催化查爾酮環化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮，通過測定 381nm 下的吸光度變化表示CHI 的活性。

組成：

試劑三：臨用前加 2ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 381nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定表

在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10µl 上清液和 190µl 試劑二，立即混勻并記錄 381nm 下初始吸光值

A1 和 37℃保溫 30min 后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。

CHI 活性計算：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應體系中每小時A381 變化 0.1 為一個酶活力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織在每ml 反應體系中每小時 A381 變化 0.1 為一個酶活力單位。

CHI（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =400×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積，0.2ml； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量。

用 96 孔板測定的計算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應體系中每小時A381 變化 0.05 為一個酶活力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.05÷T =800×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織在每ml 反應體系中每小時 A381 變化 0.05 為一個酶活力單位。

CHI（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.05÷T =800×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積，0.2ml； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量。

查爾酮異構酶試劑盒 抗氧