蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

蔗糖磷酸合成酶試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

蔗糖不僅是重要的光合產物，也是植物體內運輸的主要物質，還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸為受體，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統看作是蔗糖合成的主要途徑。

測定原理：

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸與間苯er酚反應可呈現顏色變化，在 480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

樣品測定的準備：

按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

混勻，25℃準確水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

混勻，沸水浴 30min，冷卻后， 480nm 下測定各管吸光值。標準管和空白管只要做一管。每個測定管需要設一個對照管。

SPS 活力單位的計算:

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×

（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷Cpr 2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS 活性(μg /min /g 鮮重) = C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷W

C 標準管：標準管濃度，1000μg/ml；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03ml； V2：加入提取液體積，1ml； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；T ：反應時間：10min。

蔗糖磷酸合成酶試劑盒