組織無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

組織無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒 離子系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

無機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進(jìn)碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運(yùn)。

測(cè)定原理：

鉬藍(lán)與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測(cè)定 660nm 光吸收可計(jì)算無機(jī)磷含量。

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 ml 蒸餾水，充分溶解后加入試劑二（全部），混勻。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

無機(jī)磷提取：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定：

分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 空白管。

標(biāo)準(zhǔn)管：取 EP 管，依次加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

測(cè)定管：取 EP 管，依次加入 50μl 上清液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

組織無機(jī)磷含量計(jì)算公式：

按照蛋白含量計(jì)算

無機(jī)磷含量(μmol/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷Cpr

=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

無機(jī)磷含量(μmol/g )= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W

=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：1mmol/L；V 總：上清液總體積，1ml=0.001 L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量， g。

注意事項(xiàng)：

試劑三需臨用前配制，并且當(dāng)天使用完畢。

40min 內(nèi)完成比色。

最di檢出限為 10μmol/L。

組織無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒 離子系列