諾博萊德 高純度質粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取

HiPure Plasmid Mini Kit高純度質粒小量快速提試劑盒

目錄號：31013

高純度質粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取產品內容：

保存條件：

在室溫(15~ 25℃)干燥條件下，可保存12個月。加入RNaseA后的溶液P1應置于 2 ~ 8℃保存，可穩定保存6個月,如果P1中RNase A失活，重新補加即可。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介：

本試劑盒用于高純度質粒DNA的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低pH處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質，在低鹽、高pH條件下洗脫，最后得到純度較高的質粒 DNA。所得質粒可直接用于酶切、轉化、PCR、RT-qPCR、測序及轉染等分子生物學實驗。

產品特點：

1.得率高：1.5-4.5ml可提出多達10–20ug的純凈質粒；

2.純度高：沉淀致密，去雜質徹di干凈；

3. 高效：操作簡便，快捷，節約時間。

注意事項：

1.使用前請先檢查平衡液、溶液P2和溶液P3是否出現渾濁，如有混濁現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。

2.細菌培養時間一般為12~16小時，過度培養會降低質粒質量甚至導致質粒DNA突變；

3.注意溶液P1，P2和P3的用量比例，若細菌量增大，需按比例放大這些溶液的使用量；

4.隨菌體增多應延長溶液 P2 的作用時間，直至溶液成粘稠透明狀，但時間過長會導致質粒DNA變性。

5.質粒的產量跟細菌量、質粒拷貝數、質粒大小和操作規范程度密切相關，一般1.5ml過夜培養菌體可收獲約10ug高拷貝質粒。

重要提示：

一、第一次使用前請先在去蛋白液PE、漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇（見瓶身標簽），充分混勻，并做好標記，以免多次加入。

二、首ci使用時請先將 RNaseA全部加到溶液P1中，混勻，每次使用后置于2~8℃保存。

操作步驟：

1.  柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入100ul的平衡液，12,000rpm離心1min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。

2.取1~5ml過夜培養的菌液，室溫12,000rpm離心30sec，盡量倒干上清，收集菌體。

（注意：根據菌液的濃度決定取液量，濃度高時取1.5ml菌液離心即可，濃度低時可多收集一次）

3. 加入250ul溶液P1，重懸菌體沉淀，渦旋震蕩至徹di懸浮。

（注意：如有未徹di懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）

4. 加入250ul溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次，使菌體充分裂解，室溫放置4min。

（注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過5min，以免質粒受到破壞，如未完quan變得清亮，可能是菌體太多，可增加溶液P2的用量，在后續的操作中溶液P3的用量也要相應增加）

5.加入350ul溶液P3，立即溫和地上下翻轉6-8 次，充分混勻時會出現白色絮狀沉淀，然后室溫12,000rpm離心10min。

（注意：加入溶液P3后應立即混合，避免產生SDS的局部沉淀）

6. 將上清液轉移到吸附柱中，室溫12,000rpm離心1min，質粒被吸附在膜上，棄濾液。

7.可選步驟：向吸附柱中加入500ul去蛋白液PE，室溫12,000rpm離心1min，棄濾液。

（注意：去蛋白液PE為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發）

（注意：如果宿主菌是endA-，如DH5α，此步驟可省略。如果宿主菌是 endA+，如 TG1、BL21、 HB101、JM101等，此步驟不可省略，因這些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解質粒。如果提取低拷貝質粒也推薦采用此步驟）

8. 加入600ul漂洗液 WB，室溫12,000rpm離心30sec，棄濾液。

（注意：漂洗液WB為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發）

9. 重復步驟8一次。

10.   室溫12,000rpm離心2min，甩干殘留液體。

（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響質粒的后續使用）

11.  將吸附柱置于一個新的1.5 ml離心管（自備）中，加入50~100 ul的洗脫緩沖液EB，室溫放置2 min，12,000 rpm離心1 min，離心管底溶液即質粒DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中預熱洗脫緩沖液EB，可增加洗脫效率；如果需要較多量質粒，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，再次離心1min 收集；如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調整其pH值在7.0 -8.5之間。）

低拷貝或大質粒（>10kb）提取

如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb 的大質粒，應加大菌體使用量，使用 5~10ml過夜培養物，同時按照比例增加溶液P2、P2、P3的用量，脫緩沖液EB應在65℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當延長時間，以增加提取效率，其它步驟相同。