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佐劑性關節炎動物模型2018/05/25

20世紀50年代由細菌學家Freund創立佐劑性關節炎(AA)，又稱是弗氏佐劑關節炎，是免疫性關節炎動物模型的基本方法。(1)復制方法將液體石蠟高壓滅菌，BCG80℃滅活1h，把BCG加入液體石蠟配成10g/L的乳劑，充分碾磨、混勻，即得CFA，于大鼠左后足跖皮內注射CFA0.1ml致炎。(2)模型特點原發病變主要表現為早期致炎部位的炎癥反應，致炎后18h，左足腫脹達峰值，持續3d后逐漸減輕，8d后再度腫脹，繼發病變一般出現于致炎后的10d左右，表現為對側和前足腫脹，且進行性加重，行動不便，耳和

膠原誘導性關節炎動物模型2018/05/25

自20世紀70年代次建立膠原誘導性關節炎動物模型以來，已有研究證實，類風濕關節炎患者血清及滑液中存在抗膠原抗體，且這種對膠原組織的自身免疫反應，可以解釋類風濕關節炎所具有的系統性和慢性持續性發展的特點。(1)復制方法將Ⅱ型膠原(是一種與免疫系統隔絕的蛋白質，大量存在于關節軟骨中)溶于0.1mol/L的醋酸中，在4℃下攪拌充分溶解，濃度為2g/L，置4℃冰箱過夜，再將滅活卡介苗(BCG)置于液體石蠟中，配成2g/L的弗氏佐劑，將二者等體積混合、乳化，制成Ⅱ型膠原乳劑。將該乳劑于小鼠的尾根部皮內注射

應激性十二指腸潰瘍動物模型2018/04/26

應激性十二指腸潰瘍動物模型(1)動物模型復制方法成年大鼠，禁食不禁水16h，用腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，固定后用電推子推擊被毛，區域略大于擬燒面積。用紗布團蘸溫的20％硫化鈉液在脫毛部位稍用力拍打均勻，待毛融化，用溫水將脫毛劑沖洗干凈，用紗布將水吸除，吹風機吹干已脫毛皮膚，濕布遮蓋擬燒皮膚周圍。將3％凝固汽油按0.01ml/kg體重比例均勻涂在擬燒皮膚表面，在氣流穩定的環境下點火燃燒30s。其中，3％凝固汽油的配置方法為，稱量凝固汽粉3g，加入汽油至100ml，置磨口瓶內充分攪拌，至油粉混合均勻成

乙酸誘發十二指腸潰瘍動物模型2018/04/26

乙酸誘發十二指腸潰瘍動物模型(1)動物模型復制方法成年大鼠，禁食24h禁水2h，麻醉開腹，暴露十二指腸，將一內徑為3～6mm的玻璃管或乳膠管的光滑切面緊貼十二指腸起始部(距幽門約0.5cm)前壁的漿膜面，從另一端向管內注入冰醋酸70μl，30s后移出玻璃管，迅速用濾紙吸去殘存的冰醋酸。將大網膜縫在冰醋酸涂抹處表面，縫合腹壁。手術72h后，再次麻醉剖腹，將十二指腸連同粘連的腹膜一起取出，從冰醋酸涂抹處的對面縱行剖開十二指腸，生理鹽水輕輕洗凈，解剖顯微鏡下觀察十二指腸黏膜面的損傷情況，以網格目微尺測

采用物理方法誘導角膜新生血管模型2018/04/20

采用物理方法誘導角膜新生血管動物模型(1)動物模型復制方法體重為2.5～3.5kg新西蘭兔，沖洗結膜囊，用地卡因(12.5g/L)術前點眼3次。開瞼器開瞼，采用二角針(3/8)穿1-0絲線于上方角膜作3針縫線，縫線上端距角膜緣約2.5mm，縫線埋入角膜基質層的長度約3.0mm。在角膜表面留線頭長約1.0mm。術后第3日可見新生血管生長，第18日時新生血管生長旺盛。(2)動物模型特點角膜新生血管沿縫線兩側呈局限性生長；沿著縫線方向以增長為主。其主要機制是縫線反應，即表現為炎癥形式。(3)比較醫學本

采用化學方法誘導角膜新生血管模型2018/04/20

采用化學方法誘導角膜新生血管動物模型(1)動物模型復制方法體重2.5～3.5kg新西蘭兔，體重超過4.5kg不易誘生出角膜新生血管，采用鹽丨酸氯胺銅(50mg/kg體重的劑量)和氯丙嗪(10mg/kg體重的劑量)經肌肉注射麻醉，0.5％鹽酸丙氧苯卡因點眼局麻。用棉簽拭去過多水分，直徑7mm濾紙片浸泡在濃度1mol/L氫氧化鈉溶液中10～20s后，置于兔角膜中央持續2min，第1min后，加用4mol/L氫氧化鈉溶液25μl點在濾紙中央，再留置1min。然后用15ml平衡鹽液沖洗60s。(2)動物

間接視神經損傷模型2018/04/17

間接視神經損傷模型(1)動物復制方法體重2.0～2.5kg新西蘭兔，按30mg/kg體重的劑量經耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉，將動物固定后手術顯露兩側眶上緣切跡和眶壁，咬骨鉗咬除眶壁(深7～8mm，寬6mm)，頭放在致傷管下，將自制致傷卡頭置于視神經孔上方眶板上，致傷球(45g)從致傷管上端自由落下(管長2m)，擊于致傷卡頭，經骨板將力傳遞至視神經孔致傷神經，見接光反射消失為致傷成功。(2)動物模型特點視神經組織表現為部分區域呈現脫髓鞘改變，組織疏松呈網狀，部分軸突裸露。在神經軟膜有細胞浸潤，膠質

視神經牽拉傷模型2018/04/17

視神經牽拉傷動物模型(1)動物復制方法體重700g左右豚鼠，按30mg/kg體重的劑量經腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，手術顯微鏡下切開外毗，角膜緣處360°切開，游離結膜及眼外肌，暴露視神經并將其與周圍組織分離。取一無菌吊帶，中點處剪開5mm長裂縫，將其置于眼球后，用絲線結扎固定，并使視神經向后從裂縫中穿過。豚鼠固定在立體定位架上，調節頭部支撐架，使視神經管軸向與牽拉方向一致。將固定于球后的無菌吊帶兩端以絲線連接到牽拉裝置的氣缸上，由一個脈沖發電機發出恒定電壓，帶動活塞運動，通過滑輪系統傳導至牽拉裝

化學方法建立的慢性腎功能衰竭模型2018/04/04

1.阿霉素誘導模型(1)復制方法體重250g左右成年大鼠，經腹腔按30mg/kg體重劑量注射戊巴比妥鈉麻醉，麻醉后大鼠仰臥固定于手術板上，腹部手術區常規消毒、去毛，沿右腹旁切口切開皮膚，暴露右側腎臟，結扎腎蒂后，切除右腎，常規手術縫合切口，關閉腹腔。15d后，按5mg/kg體重的劑量經大鼠尾靜脈注射阿霉素(adriamycin,ADR)，12周后即可復制出CRF模型；如長期造模則需要觀察28～48周。造模前后將模型大鼠置于代謝籠收集24h尿液，測定24h尿液量及尿蛋白量；按實驗預定時間取靜脈血樣

物理學方法建立的慢性腎功能衰竭模型2018/04/04

1.腎大部分切除法(1)復制方法體重250g左右成年大鼠，經腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉，麻醉后大鼠行仰臥固定，腹部備皮、消毒，沿左腹旁切口切開皮膚，暴露左側腎臟，切開上、下極的包膜，上下極分別切除腎臟的1/3，用明膠海綿壓迫創面止血，生理鹽水沖洗，常規手術縫合肌層和皮膚，關閉腹腔。一周后，大鼠用同樣方法麻醉后仰臥固定，沿右腹旁切口切開皮膚，暴露右側腎臟，結扎腎蒂后，切除右腎，常規手術縫合切口，關閉腹腔。造模前后將模型大鼠置于代謝籠收集24h尿液，測定24h蛋白定量；按實驗預

外傷性白內障模型2018/03/09

(1)復制方法3～4個月齡健康青紫藍兔，先用0.5％阿托品滴眼液滴眼2次及復方托品酞胺滴眼液滴眼3次，30min后經肌肉注射氯丨胺丨酮及異丙嗪進行麻醉，并以0.5％地卡因滴于結膜囊局部麻醉。在手術顯微鏡下用一次性1ml注射器在角膜偏中央部位刺穿角膜，并用針頭將晶狀體前囊劃開約1mm×1.5mm呈橢圓形小口，再用針頭深達晶狀體中央沿前囊創口長軸方向劃開數次。術畢結膜囊涂抹抗生素眼膏。術后每日用裂隙燈顯微鏡檢查術眼晶狀體情況。(2)模型特點術后2周時模型動物術眼即可形成外傷性白內障，其晶狀體渾濁，渾

鈍挫傷白內障模型2018/03/09

(1)復制方法4周齡的雌性大鼠，散瞳后裂隙燈檢查，排除角膜病、葡萄膜疾病、晶狀體及玻璃體疾病。按3ml/kg體重的劑量經腹腔注射10％水合氯醛溶液致全身麻醉，動物規定于操作臺后，用20g小球從20cm高度落下打擊大鼠的左眼，每周1次，每次100下，進行數周。(2)模型特點第1次打擊3d后，大鼠實驗眼可見晶狀體前囊出現散在點狀及片狀混濁，中央瞳孔區環狀混濁。第6日時晶狀體前囊散在片狀混濁已消失，而晶狀體前囊近中央瞳孔區環狀及樹枝狀混濁則無明顯改變。反復打擊(第2～5次)，晶狀體前囊反復出現散在點狀

硒性白內障模型2018/03/09

(1)復制方法取體重為25g左右出生12d齡幼年大鼠，按0.26ml/kg體重的劑量經大鼠腹腔注射0.1％亞丨硒丨酸丨鈉溶液，一次注射即可使大鼠發生白內障。(2)模型特點動物造型后5d其晶狀體核即混濁，至30d時模型動物晶狀體核仍混濁。模型動物一次性腹腔注射0.1％亞丨硒丨酸丨鈉溶液3～5d，即可迅速造成嚴重的核性白內障，采取本方法復制的模型比糖性白內障動物模型形成的速度(1～2個月)要快得多，本模型復制方法簡單，耗費低廉，重復性好。(3)比較醫學長期缺硒的兔晶體和肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶活性分

藥物安全藥理試驗設計要求2018/02/02

1.生物材料生物材料有以下幾種：整體動物，離體器官及組織，體外培養的細胞、細胞片段、細胞器、受體、離子通道和酶等。整體動物常用小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、犬、非人靈長類等。動物選擇應與試驗方法相匹配，同時還應注意品系、性別及年齡等因素。生物材料選擇應注意敏感性、重現性和可行性，以及與人的相關性等因素。體內研究建議盡量采用清醒動物。如果使用麻醉動物，應注意麻醉藥物的選擇和麻醉深度的控制。實驗動物應符合對相應等級動物的質量規定要求，并具有實驗動物質量合格證明。2.樣本量試驗組的組數及每組動物數的設定，應

冰凍切片機使用步驟和注意事項2018/02/02

(1)按電源開關I/O側的I(開)側，接通儀器電源。待儀器進行短暫時間的初始化(屏幕上將顯示一個沙漏標志)后，請檢查上方顯示屏是否亮起，是否顯示語言選擇菜單。(2)請檢查速凍臺、冷凍箱及其切片厚度是否為實驗所需要的相74關數據，通常速凍臺為-35℃，冰凍箱為-20℃，切片厚度為6μm。如若不是，在屏幕上點擊要修改的事項，用或調節到需要的數據。調節好后，等待機器降到所調節的溫度。(3)將手輪手柄旋轉到12點鐘的位置，然后進行制動。將樣品利用冰凍膠固定在樣本托上，并放于速凍臺上降溫。10min后，將

小鼠生化位點檢測2018/02/02

小鼠生化位點檢測乙酸纖維薄膜電泳是生物化學的方法，該技術運用于實驗動物遺傳質量控制只有二十余年的歷史。由于該方法能檢查近20對等位基因，涉及十幾條染色體，利于反映被檢品系的遺傳概貌，所以，目前認為此法靈敏度高，準確性強，檢出速度快，用樣量小，是遺傳檢測諸方法中較為理想的一種。一、實驗器材1．樣品(1)血清：用于Es-1和Trf兩位點檢查。(2)溶血清：用于檢查Hbb、Car-2和Ldr-1位點。(3)腎勻漿：用于檢查Es-2、Es-3、Idh-1、Mod-1、Akp-1、Pgm-1、Pep-1、

免疫學檢測方法與免疫技術2018/02/02

免疫學檢測方法與免疫技術免疫學檢驗方法和免疫化學技術主要包括：抗原抗體的制備、純化和鑒定，免疫擴散、免疫電泳、免疫凝集試驗、補體結合試驗，免疫細胞分離、純化和鑒定，免疫功能檢測，細胞因子檢測，放射免疫檢測，免疫酶標檢測，熒光和發光免疫技術，免疫組化實驗方法，原位雜交免疫組化，免疫PCR技術，免疫微球的應用，免疫電鏡技術，細胞凋亡的檢測方法，膜受體分析，胞內鈣鎂濃度的測定和細胞間通訊，流氏細胞儀技術及應用等。從上述內容可以看出，免疫技術是免疫學和物理、化學及電子信息和分子生物學理論和技術的結合產物

構建基于熒光多重cPCR的小鼠基因拷貝數檢測方法2018/02/02

構建基于熒光多重cPCR的小鼠基因拷貝數檢測方法目的：建立基于競爭性聚合酶鏈式反應(competitivepolymerasechainreaction,cPCR)小鼠基因拷貝數變異(copynumbervariations,CNVs)的檢測方法,用于檢測野生小家鼠來源一號染色體替換系群體(populationofspecificchromosome1substitutionstrains,PCSSs)的CNVs。方法：選取小鼠一號染色體上11個CNVs位點,及7、9和X染色體上各1個內對照位點

ELISA：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法2018/02/02

ELISA：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。2.加樣：加稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗

ELASA：用于檢測未知抗體的間接法2018/02/02

ELASA：用于檢測未知抗體的間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。2.次日洗滌3次。3.加稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸