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人正常組織來源細(xì)胞培養(yǎng)中污染特點分析2017/04/25
人正常組織來源細(xì)胞細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。黑膠蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明
冷凍保存細(xì)胞的解凍與復(fù)蘇要點2017/04/20
腫瘤細(xì)胞冷凍保存細(xì)胞的解凍與復(fù)蘇要點：慢凍快融（1）快速解凍。凍存細(xì)胞從液氮中取出后，應(yīng)立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。（2）解凍操作過程動作要輕。由于冷凍保存過的細(xì)胞變得非常脆弱，不僅解凍速度要快，而且動作要輕。一般情況下，解凍后的細(xì)胞可直接接種到含*生長培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)（1ml凍存細(xì)胞液加入到25－30ml新鮮*培養(yǎng)液中），24小時后再用新鮮*培養(yǎng)替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。如果，細(xì)胞對冷凍保護(hù)劑特別敏感，那么，解凍后的細(xì)胞應(yīng)
外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制備與分析2017/04/18
1.轉(zhuǎn)化細(xì)胞采血及接種培養(yǎng)1.1在酒精燈火焰上，用滅菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml，使肝素濕潤至管壁。1.2常規(guī)消毒后，采集外周靜脈血5ml，轉(zhuǎn)動注射器使血液與肝素混勻。1.3在超凈工作臺中，預(yù)先將RPMI1640液體培養(yǎng)基（5ml，含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培養(yǎng)瓶中，再滴加25滴全血（6號針頭），水平搖動混勻。1.4置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)過程中每天水平搖動培養(yǎng)物1～2次，使血液均勻懸浮，再繼續(xù)培養(yǎng)。1.5終止培養(yǎng)前2～4小時，加入秋水
il-7細(xì)胞來源和主要功能2017/04/13
腫瘤細(xì)胞來源：il-7是由骨髓基質(zhì)細(xì)胞分泌的糖蛋白，分子量為25kd；其基因位于第8號染色體。現(xiàn)多采用基因工程手段，從轉(zhuǎn)染含il-7cdna表達(dá)性質(zhì)粒的哺乳類細(xì)胞培養(yǎng)上清中獲取il-7。il-7的靶細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞，對來自人或小鼠骨髓的b祖細(xì)胞、胸腺細(xì)胞及外周成熟的t細(xì)胞等均有促生長活性。腫瘤細(xì)胞主要功能：（1）、與干細(xì)胞生長因子（scf）協(xié)同能夠刺激b前體發(fā)生有絲分裂，這一效應(yīng)可被tgf和所抑制；但對b祖細(xì)胞（pro-b）的生長沒有明顯作用。（2）、促進(jìn)雙陰性胸腺細(xì)胞的成熟，提供胚胎胸腺細(xì)胞
人正常組織來源細(xì)胞染色體制備方法2017/04/11
1、人正常組織來源細(xì)胞實驗材料培養(yǎng)液（PRMI1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度離心管，直吸管及彎頭吸管，培養(yǎng)瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。2、培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液85-95%小牛血清5-15%雙抗（選擇）100u/ml3、人正常組織來源細(xì)胞操作過程（1）培養(yǎng)細(xì)胞：選擇處于指數(shù)生長期、用大瓶培養(yǎng)的80-90%匯合單層培養(yǎng)細(xì)胞；（2）終止培養(yǎng)：當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養(yǎng)混合液，置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6-10小時以抑
利用同源重組構(gòu)建基因敲除動物模型的基本步驟2017/04/06
①.人正常組織來源細(xì)胞基因載體的構(gòu)建：把目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因特異片段同源的DNA分子都重組到帶有標(biāo)記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，成為重組載體。基因敲除是為了使某一基因失去其生理功能，所以一般設(shè)計為替換型載體。②.ES細(xì)胞的獲得：現(xiàn)在基因敲除一般采用是胚胎干細(xì)胞，zui常用的是鼠，而兔，豬，雞等的胚胎干細(xì)胞也有使用。常用的鼠的種系是129及其雜合體，因為這類小鼠具有自發(fā)突變形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的傾向，是基因敲除的理想實驗動物。而其他遺傳背景的胚胎人正常組織來源細(xì)胞也逐漸被發(fā)展應(yīng)用
人正常組織來源細(xì)胞周期的測定方法2017/04/01
一、人正常組織來源細(xì)胞原理細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。測定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計數(shù)法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細(xì)胞周期的方法。BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后，可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料，經(jīng)過兩個細(xì)胞周期后，細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一
動物細(xì)胞培養(yǎng)條件分析2017/03/30
轉(zhuǎn)化細(xì)胞在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，zui困難的是動物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清:動物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。zui常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學(xué)會了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時血清才可被取代。在這里，血清等于是動物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。⑵支持物:大多數(shù)動物轉(zhuǎn)化細(xì)胞有貼壁生長的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件，每一次開箱操作后的快速恢復(fù)對設(shè)備
細(xì)胞培養(yǎng)中使用血清的缺點2017/03/28
腫瘤細(xì)胞血清成分復(fù)雜，雖含許多對細(xì)胞有利成分，也含有對細(xì)胞有害的成分，使血清有幾個明顯的缺點：●對大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(成纖維細(xì)胞)同時抑制另一類細(xì)胞生長(表皮細(xì)胞)。●血清含一些對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會影響細(xì)胞生長，甚至造成細(xì)胞
TFAR19蛋白的細(xì)胞定位分析2017/03/23
人正常組織來源細(xì)胞材料試劑：FITC標(biāo)記的單克隆抗體，pH7.4、0.15Mol/LPBS，3%的多聚甲醛，PBS-T(pH7.4、0.15Mol/LPBS含0.2%Tween20)，胎牛血清，熒光細(xì)胞洗液：pH7.4、0.15Mol/LPBS含2%胎牛血清及0.1%NaN3。FACS管，Tip頭，移液器。儀器：低溫水平離心機(jī),37°C水浴箱，熒光顯微鏡，共聚焦激光掃描顯微鏡，流式細(xì)胞計方法：1懸浮細(xì)胞的染色：(1)收獲正常和誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞(0.5~1′106)，PBS洗2次，1000rpm′1
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法分析2017/03/21
1.轉(zhuǎn)化細(xì)胞消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光
單個細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)分析2017/03/16
材料1．轉(zhuǎn)化細(xì)胞的制備經(jīng)過原代或傳代培養(yǎng)的細(xì)胞。2．培養(yǎng)用液克隆適應(yīng)培養(yǎng)液、Hanks液、0.125％胰蛋白酶。3．培養(yǎng)用品包括直徑為0.5mm，長為8mm的毛細(xì)玻璃管，培養(yǎng)瓶皿、培養(yǎng)板（24孔、96孔）、吸管、微量加樣器等。方法1．稀釋克隆法（1)毛細(xì)管克隆法1)將一定量的細(xì)胞懸液（如105個／ml或更低）倍比稀釋至1個／ml;2）取l0ml稀釋的細(xì)胞懸液，用直徑為0.5mm，長為8mm的毛細(xì)玻璃管若干（30～50支），在負(fù)壓作用下，將懸液吸入各毛細(xì)管中；3）在倒置顯微鏡下檢查出每管只有1個細(xì)
細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和酸性蛋白的顯示原理和方法2017/03/14
原理轉(zhuǎn)化細(xì)胞由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團(tuán)的數(shù)目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下，整個蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷多，則為酸性蛋白質(zhì)；帶正電荷多，則為堿性蛋白質(zhì)。據(jù)此，可將標(biāo)本經(jīng)三氯醋酸處理提出核酸后，用不同pH值的固綠染液分別染色，細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白和堿性蛋白質(zhì)顯示出來。轉(zhuǎn)化細(xì)胞方法1．以破壞脊髓法處死蟾蜍，將其腹面向上放人蠟盤中，剪開胸腔，打開心包。小心將心臟剪一小口，取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端，推片，按此法制備二張血涂片，室溫晾干。2.將涂片作好標(biāo)
轉(zhuǎn)化細(xì)胞計數(shù)原理和計數(shù)方法2017/03/09
轉(zhuǎn)化細(xì)胞實驗原理測定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微直接計數(shù)法和稀釋平板計數(shù)法。直接計數(shù)法適用于各種單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，則難于直接測定。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數(shù)板，一般細(xì)菌則采用彼得羅夫·霍澤(PetrofHausser)細(xì)菌計數(shù)板。兩種計數(shù)板的原理和部件相同、只是細(xì)菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計數(shù)板下部的細(xì)菌難于區(qū)分。血球汁數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽所構(gòu)成的3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被
細(xì)胞培養(yǎng)液如何選配2017/03/07
1.人正常組織來源細(xì)胞選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn)，某種培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞，某種細(xì)胞也可以在不同培養(yǎng)液中生長。但是，建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞的培養(yǎng)基。可以查閱參考文獻(xiàn)，或在購買細(xì)胞株時咨詢。2.1640的確是非常便宜的培養(yǎng)基，也很好用。但是，它的緩沖力zui弱，所以有時會對細(xì)胞的生長狀態(tài)有影響，尤其是一些實驗室長期傳代狀態(tài)不好的細(xì)胞。有條件還是用DMEM培養(yǎng)基。3.一旦在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，放入4度冰箱。應(yīng)該在2到3周內(nèi)用完它。因為，一些抗生素和血清中的基本成分
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