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上海申知心生物科技有限公司
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高質(zhì)量RNA提取條件之二2019/01/16
1.選擇好的RNA分離方法現(xiàn)有眾多的RNA分離方法也許令人難以取舍。目前簡單也是安全的方法是柱式分離,如RNApure因為操作簡單,時間短,純度高而受到大家的喜愛,RNApure不需要DNA酶消化DNA,節(jié)省了時間,避免RNA的降解,從而提高了產(chǎn)量;相對非柱式分離(如TRIZOL),去除蛋白及其他雜質(zhì)干凈,提高了純度,對于細(xì)胞、組織、一般植物均非常適合。植物RNA的提取比較難抉擇,植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質(zhì)、次生代謝物含量的影響,一般用TRIZOL提取純度不高,而且很多植物用TRIZOL
科研中的miRNA研究方法總結(jié)2019/01/16
科研中的miRNA研究方法總結(jié)microRNA(miRNA)是一類長度在22nt左右的內(nèi)源非編碼小RNA,廣泛存在于動物、植物、病毒等多種有機(jī)體中。1993年,Lee等人在秀麗新小桿線蟲(C.elegans)中發(fā)現(xiàn)了控制著線蟲時序性發(fā)育的lin-4。2000年,Reinhart等發(fā)現(xiàn)了另一個具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)功能的小分子RNA:let-7。隨后的幾年時間里,許多研究人員相繼發(fā)現(xiàn)了這類RNA,并將這些具有時空表達(dá)特異性的非編碼小分子RNA命名為microRNA(miRNA)。從長的初級miRNA(pr
科研有六重境界,你到第幾重了?2019/01/16
臨淵羨魚階組里的前輩們看起來個個都是牛人,各有各的事業(yè),可是喂~誰來提挈小生則個!導(dǎo)師:“在咱們這個組的大框架下自己找個坑填上去~”——坑在哪?師姐:“問我問題之前不能先自己查一下嘛?你這個問題明明有現(xiàn)成答案呀~”——上哪查師兄:“去去去,小孩子一邊看文獻(xiàn)去!”——看不懂~_看什么文獻(xiàn),怎么看?專業(yè)術(shù)語不懂怎么辦?好吧,大不了啃字典,先把組里發(fā)過的文章都過一遍好了。終于有一天組會討論時,哇我居然聽懂了躍躍欲試階已經(jīng)能相當(dāng)熟練地在知網(wǎng)、NCBI等數(shù)據(jù)庫上查到自己想要的信息了,儀器不用會時也會查說明
八臂迷宮實驗2019/01/16
一、八臂迷宮實驗原理八臂迷宮(8-ArmMaze)用來檢測藥物或大腦受損狀態(tài)下學(xué)習(xí)和記憶方面的表現(xiàn),它由八個相同的臂組成,這些臂從一個平臺放射出來,所以又被稱為放射迷宮(RadialMaze)。每個臂盡頭有食物提供裝置,根據(jù)分析動物取食的策略即進(jìn)入每臂的次數(shù)、時間、正確次數(shù)、錯誤次數(shù)、路線等參數(shù)可以反映出實驗動物的空間記憶能力。相對而言,八臂迷宮操作簡便、可行,而且能區(qū)分短期的工作記憶和長期的參考記憶,現(xiàn)已被用于學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知實驗功能評價。二、八臂迷宮實驗方法及應(yīng)用1)動物適應(yīng)實驗環(huán)境1周后,稱重
Y迷宮實驗2019/01/16
一、Y迷宮實驗(Y-Maze)原理Y-迷宮由DelluF等發(fā)明,被應(yīng)用于功能減退、趨向性、空間工作記憶等研究領(lǐng)域。Y迷宮主要用于研究嚙齒類動空間工作記憶,其是利用實驗動物對新異環(huán)境探索的天性,由于動物每次轉(zhuǎn)換探索方向時都需要記住前一次探索過的方向,因此Y型迷宮實驗?zāi)軌蛴行У販y定動物的空間工作能力。二、Y迷宮實驗介紹Y形迷宮(Ymaze)即為三等分輻射式迷宮,由三個支臂一個連接區(qū)組成,三臂相互夾角為120°,每臂末部鋪以食物槽,用以盛放食物。各臂可依次分為起步區(qū)、錯誤臂以及正確臂。一般將動物經(jīng)訓(xùn)練
曠場實驗2019/01/16
一、曠場實驗介紹曠場實驗是利用動物對新開闊環(huán)境的恐懼而主要在周邊區(qū)域活動,在區(qū)域活動較少,但動物的探究特性又促使其產(chǎn)生在區(qū)域活動的動機(jī),也可觀察由此而產(chǎn)生的焦慮心理。藥物可以明顯增加自主的活動而減少探究行為,劑量的抗精神病藥物可以減少探究行為而不影響自主活動。二、曠場實驗原理該實驗(openfieldtest)又稱敞箱實驗,是評價實驗動物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。以實驗動物在新奇環(huán)境之中某些行為的發(fā)生頻率和持續(xù)時間等,反應(yīng)實驗動物在陌生環(huán)境中的自主行為與探究行為,以尿便次
采用D-半乳糖誘導(dǎo)白內(nèi)障模型2019/01/16
(1)復(fù)制方法將D-半乳糖用生理鹽水配制成50%注射液,常規(guī)滅菌后待用;復(fù)方托品酰胺滴眼劑供鏡檢前擴(kuò)瞳用。用3周齡體重25g左右大鼠,經(jīng)復(fù)方托品酰胺滴眼劑散瞳后,裂隙燈檢查晶狀體透明。造模大鼠均采用常規(guī)消毒,然后于頸背部每日經(jīng)皮下按30ml/kg體重的劑量注射50%半乳糖,每天1次,連續(xù)30d。于次注射后第7,14,21,30日分別以復(fù)方托品酰胺滴眼劑散瞳后用裂隙燈觀察晶狀體的動態(tài)變化。(2)模型特點注射D-半乳糖7d后,大鼠開始出現(xiàn)白內(nèi)障早期改變,即晶狀體周邊皮質(zhì)出現(xiàn)空泡;給藥14d、21d及
腎虛黃體抑制動物流產(chǎn)模型2019/01/16
(1)復(fù)制方法雌性成年大鼠與雄性大鼠隔夜同籠飼養(yǎng)交配,次日早晨觀察交配后陰栓脫落情況,將發(fā)現(xiàn)陰栓日定為妊娠1日,然后單籠常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水及進(jìn)食。妊娠1~10日,孕鼠每日按450mg/kg體重的劑量灌服羥基脲以造成腎虛模型,在妊娠10日按3.75mg/kg體重的劑量灌注米非司酮以造成流產(chǎn)模型。腎虛模型大鼠妊娠后出現(xiàn)納差、活動減少、反應(yīng)遲鈍、體重呈負(fù)增長。孕鼠體內(nèi)過氧化物歧化酶(SOD)減少,蛻膜孕激素受體表達(dá)下降。(2)模型特點羥基脲是核苷酸還原酶抑制劑,使用后使大鼠SOD明顯減少。有研究提示自
脾虛黃體抑制動物流產(chǎn)模型2019/01/16
(1)復(fù)制方法雌性成年大鼠與雄性大鼠隔夜同籠飼養(yǎng)交配,次日早晨觀察交配后陰栓脫落情況,將發(fā)現(xiàn)陰栓日定為妊娠1日,然后單籠常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水及進(jìn)食。妊娠1~10日,孕鼠每日按0.15mg/kg體重的劑量肌注利血平建立脾虛模型,在妊娠第10日按3.75mg/kg體重的劑量經(jīng)口灌注米非司酮以造成流產(chǎn)模型。脾虛大鼠造模第5日即出現(xiàn)納差、嗜睡、便軟、肛門污穢等脾虛癥候,形體消瘦,體重減輕,流產(chǎn)率增加。部分流產(chǎn)子宮內(nèi)見淤血,胎盤不完整;流產(chǎn)子宮呈竹節(jié)樣改變。光鏡下,流產(chǎn)模型子宮蛻膜組織壞死出血。卵巢黃體直徑
自身免疫性內(nèi)耳病動物模型2019/01/16
自身免疫性內(nèi)耳病動物模型(1)復(fù)制方法取4周齡近交系雄性C57BL/6小鼠,以及體重為300~400g,經(jīng)檢查耳郭反射正常,無中耳感染的豚鼠。豚鼠麻醉后心臟灌注,斷頭取顳骨,在4℃無菌含1mg/L抑肽酶的10mmol/LTris緩沖液中剝離全部內(nèi)耳膜性組織,勻漿。勻漿液離心,取上清液-20℃凍存;沉淀在含0.5%十二烷基硫酸鈉、0.5%β-巰基乙醇、1%甘油、2mmol/L苯甲丨基丨磺丨酰丨氟、10mmol/LN-己基順丁烯二甲亞胺的50mmol/LTris緩沖液中勻漿,計算蛋白含量,-80℃分
神經(jīng)性耳聾動物模型2019/01/16
神經(jīng)性耳聾動物模型(1)復(fù)制方法健康普通級雜色豚鼠,雌雄不拘,體重為400~500g,耳郭反射靈敏.耳鏡檢查排除外耳、中耳炎癥。方法①:G-菌內(nèi)毒素脂多糖1g/L,顯微鏡下實驗組每只動物經(jīng)雙耳鼓膜注入大腸桿菌脂多糖;對照組注入等量生理鹽水做對照。方法②:經(jīng)肌肉注射卡那霉素(或慶大霉素)400mg/kg體重,1次/d,共7~10d。分別檢查造模前和造模后1d、10d耳郭聽力反射和腦干誘發(fā)電位。處死動物,解剖耳顳部組織,從圓窗及蝸尖分別灌注1%硝酸銀或3%戊二醛固定,作耳蝸鋪片及掃描電鏡觀察。(2)
骨關(guān)節(jié)炎動物模型2019/01/16
骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是中老年人常見的一種慢性進(jìn)行性疾病。是由于關(guān)節(jié)軟骨退行性改變(退變)和關(guān)節(jié)表面邊緣形成新骨的退行性病變,其病因、分子生物學(xué)、早期診斷和治療均存在問題,需要進(jìn)一步研究。骨關(guān)節(jié)炎動物模型無疑是研究人類骨關(guān)節(jié)炎病理機(jī)制和防治方法的良好工具。骨關(guān)節(jié)炎動物模型有的是自發(fā)的,也可通過關(guān)節(jié)制動、手術(shù)改變關(guān)節(jié)應(yīng)力、破壞關(guān)節(jié)血液循環(huán)、關(guān)節(jié)內(nèi)藥物注射、關(guān)節(jié)內(nèi)植入軟骨碎片等方法建立。1自發(fā)性動物模型(1)C57BL小鼠自從20世紀(jì)40年代Silberberg先發(fā)現(xiàn)C57B
卵蛋白性關(guān)節(jié)炎模型2019/01/16
(1)復(fù)制方法將卵蛋白溶解于生理鹽水配成20g/L的溶液,然后與等量弗氏佐劑充分混合。動物背部皮下注射,1次/周,連續(xù)3周致敏,末次注射后2周于關(guān)節(jié)內(nèi)注入5mg溶解的卵蛋白。(2)模型特點注射后24h內(nèi),模型動物注射部位關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅腫熱痛等急性炎癥的表現(xiàn)。卵蛋白誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎模型的病理改變有增生、血管翳形成和軟骨及骨破壞。*階段為關(guān)節(jié)內(nèi)注入抗原后24h關(guān)節(jié)腫脹。關(guān)節(jié)直徑可增加32%,病理表現(xiàn)為急性滑膜炎,大量滲出液。隨后關(guān)節(jié)腫脹有所減輕,但仍比正常關(guān)節(jié)腫大。第二階段為1~4周,關(guān)節(jié)滑膜明顯增生,血管
大骨節(jié)病動物模型2019/01/16
大骨節(jié)病(kaschin-beckdisease,KBD)是一種以關(guān)節(jié)骺軟骨的深層壞死為主要改變的地方性變形性骨關(guān)節(jié)病。本病常呈多發(fā)性;導(dǎo)致軟骨內(nèi)成骨障礙、管狀骨變短和繼發(fā)性的變形性關(guān)節(jié)病。主要發(fā)生于兒童和少年。1雞大骨節(jié)病模型(1)復(fù)制方法常規(guī)全價營養(yǎng)飼料,按每日每只100μg/kg體重的劑量給T-2毒素加入擬攝入的定量飼料中。每周按體重配飼料一次。T-2毒素純度,無水乙醇配制成母液,蒸餾水稀釋,分次取定量溶液加入定量飼料,仔細(xì)混勻。實驗期30d。(2)模型特點實驗期間動物的活動能力、站立和舉
兔燙傷模型2019/01/16
兔燙傷模型(1)復(fù)制方法體重2.5kg左右實驗兔在實驗前1d用100g/L硫化鈉脫去背部被毛,實驗前禁食不禁飲水12h,乙丨醚吸入法全身麻醉后,將大鼠背部和軀干兩側(cè)浸入95℃恒溫水中燙30s,造成30%體表面積Ⅲ度燙傷。(2)模型特點燙傷48h后兔平均動脈壓下降,總外周血管阻力明顯上升,心臟指數(shù)明顯下降。血中肌酸磷酸激酶、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素和肺通透指數(shù)均明顯上升;動脈血氧分壓、氧飽和度雖然明顯下降但沒有達(dá)到呼吸衰竭的程度;動物的心、肝、腎三種器官發(fā)生功能衰竭,肺功能下降,特別是心臟功能衰竭為
大鼠燙傷模型2019/01/16
大鼠燙傷模型(1)復(fù)制方法按30mg/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射3%戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉大鼠,根據(jù)體重腹部備皮,然后固定于實驗臺上。將大鼠移近加熱自來水的燒杯,將紗布條浸入熱水中,待水溫恒定于99℃時,取出紗布,立即平鋪于待燙部位,以紗布接觸大鼠皮膚后計時。(2)模型特點大體觀察:致傷3s大鼠局部皮膚發(fā)紅、輕微水腫。愈合后毛發(fā)生長良好,有少量紅褐色丨色素沉著,皮膚輕微攣縮,表皮光滑。致傷10s大鼠局部皮膚發(fā)白、水腫。愈合后毛發(fā)生長良好,皮膚瘢痕形成,表面粗糙不平。光鏡觀察:致傷3s大鼠表皮層次尚
小型豬燙傷模型2019/01/16
小型豬燙傷模型(1)復(fù)制方法小型豬實驗前禁食12h,按0.7ml/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射50g/L硫噴妥鈉麻醉后背部剃毛,面積40cm×25cm。超級恒溫儀的水溫(100℃)恒定后,將燙傷探頭(銅質(zhì)、圓形,直徑18cm,面積2.54cm2,探頭通過絕熱材料包裹的硅膠管與超級恒溫儀連接)輕輕抵在小型豬背部皮膚上進(jìn)行燙傷。具體燙傷位置在脊柱兩側(cè)各旁開2cm處,根據(jù)實驗需要確定燙傷刨面的個數(shù)。(2)模型特點不同時間燙傷后創(chuàng)面均呈現(xiàn)與燙傷探頭形狀相同的圓形,面積一致。邊緣整齊,燙傷部位與周圍組織皮膚界
肌炎動物模型2019/01/16
肌炎動物模型多發(fā)性肌炎(polymyositis)是神經(jīng)肌肉疾病中常見的一種自身免疫病。細(xì)胞免疫和體液免疫異常對肌組織的損害起關(guān)鍵作用。1大鼠肌炎模型(1)復(fù)制方法取豚鼠骨骼肌,用刀式勻漿機(jī)勻漿,制備肌漿球蛋白,在成年Lewis大鼠的雙側(cè)腳掌、背部兩側(cè)、尾根部5點,皮下注射弗氏佐劑(CFA)加等量肌球蛋白懸液;免疫劑量按每點1ml/kg體重,每周免疫1次,連續(xù)4周。同時經(jīng)腹腔注射百日咳桿菌原液,每只0.5ml,細(xì)菌數(shù)為4.0×10的10次方個。(2)模型特點大多數(shù)模型大鼠均表現(xiàn)出活動遲緩、行走搖
藥物誘發(fā)的抑郁模型2018/12/25
藥物誘發(fā)的抑郁模型此類模型是早期基于藥物之間的相互作用而產(chǎn)生的,這些模型主要起著篩選具有專一神經(jīng)化學(xué)作用抗抑郁藥的作用,可作為抗抑郁藥初篩的一種手段。一、利血平拮抗(reserpinereversal)(1)基本原理利血平是一種囊泡再攝取抑制劑,它可抑制囊泡對單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(NA、Ad、DA和5-HT)的再攝取而使其留在囊泡外,被單胺氧化酶降解,從而使囊泡內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)逐漸減少以至耗竭。動物可出現(xiàn)眼瞼下垂、體溫下降以及僵直癥狀。預(yù)先給予三環(huán)類抗抑郁藥和單胺氧化酶抑制劑,可拮抗上述癥狀。(2)復(fù)制方
大鼠嗅球切除模型2018/12/25
大鼠嗅球切除模型動物嗅球切除后可出現(xiàn)許多行為學(xué)改變,如自發(fā)活動增加、學(xué)習(xí)記憶功能降低、應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)、進(jìn)食和性行為改變等,這些可能與改變了不同腦區(qū)5-HT能系統(tǒng)功能有關(guān)。(1)復(fù)制方法1)手術(shù)方法雄性大鼠,體重為250~300g,手術(shù)前至少3~4d每日數(shù)次的撫摸。將大鼠分組,以水合氯醛(按350~400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50~60mg/kg體重的劑量)經(jīng)腹腔注射麻醉后,剪除頭頸部毛發(fā),皮膚常規(guī)消毒。固定動物在立體定位儀上,兩耳連線中點縱向?qū)⑵つw切開,暴露顱骨。在冠狀縫和
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