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克隆抗體的特點(diǎn)和應(yīng)用2023/02/09: 單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。1975年分子生物學(xué)家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上，創(chuàng)建立雜交瘤技術(shù)，他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細(xì)胞融合，成為雜交細(xì)胞系，既具有瘤細(xì)胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細(xì)胞的合成

多克隆抗體及抗體制備流程2023/02/09: 抗體，又名免疫球蛋白(Ig)，是一種由B細(xì)胞產(chǎn)生的大型Y形糖蛋白，可在免疫防御中起主要作用?？贵w與病原體的特定分子（即抗原）發(fā)生特異性結(jié)合?？贵w以一個或者多個Y形單體存在，每個Y形單體由4條多肽鏈組成。每個Y形單體包含兩條相同的重鏈（H）和兩條相同的輕鏈（L），重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y形單體的頂部包含可變區(qū)（V），也稱抗原結(jié)合片段（F(ab)）區(qū)。該區(qū)可與給定抗原上的表位特異性緊密結(jié)合?？贵w的基本結(jié)構(gòu)包含恒定區(qū)（C）和可結(jié)晶片段（Fc）區(qū)。這一區(qū)域?qū)贵w的免疫應(yīng)答功能非常重要。此外，將熒光

蛋白酶K的應(yīng)用2023/02/09: 近年來，隨著對蛋白酶K研究的深入，該酶的應(yīng)用范圍不僅在醫(yī)療診斷及科研領(lǐng)域得到了十分廣泛的應(yīng)用，該酶還作為替代其它作用范圍較窄的蛋白酶，主要應(yīng)用于造紙、工業(yè)制革、飼料生產(chǎn)、食品加工等行業(yè)中。此外，該酶還可以替代傳統(tǒng)的通過化學(xué)方法處理原材料的方法，減少污染。在各行各業(yè)中，蛋白酶K的主要用途有：①在分離DNA和RNA的過程中，用于核酸酶的蛋白水解失活。蛋白酶K能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)，促進(jìn)蛋白與核酸的分離，因此該酶在提取高分子量的核酸時具有很大的優(yōu)勢。蛋白酶K還常被用于RNA提取過程中抑制和降解RNa

什么是蛋白酶K，蛋白酶K的生產(chǎn)有哪些挑戰(zhàn)？2023/02/09: 蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為碳源和氮源的環(huán)境中生長，說明該酶可以消化角蛋白，因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成，含有277個氨基酸，該蛋白的相對分子量~28.9kDa，蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點(diǎn)催化三聯(lián)體(Asp39-His69-Ser2

熒光蛋白Marker優(yōu)化方案2023/02/09: 熒光蛋白Marker優(yōu)化方案有報道稱一種自預(yù)染熒光蛋白Marker，能夠?qū)崿F(xiàn)蛋白Marker即是預(yù)染蛋白又是曝光蛋白。具體原理是：將天然提取的熒光蛋白（包括藻紅蛋白、藻藍(lán)蛋白、別藻藍(lán)蛋白、綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白和紅色熒光蛋白等，其分子量為20-300kDa），與能夠結(jié)合抗體IgG的proteinA、proteinG和能被二抗結(jié)合的抗體Fc區(qū)蛋白或肽共價偶聯(lián)，由于熒光蛋白自帶顏色，從而實現(xiàn)蛋白即是預(yù)染蛋白，又是熒光蛋白的目的，無需轉(zhuǎn)膜染色或X光片成像，此外，熒光蛋白Marker條帶可特異性結(jié)合

mRNA疫苗生產(chǎn)流程及具體步驟2023/02/08: mRNA疫苗生產(chǎn)流程及具體步驟Step1：將含病毒的核酸序列的質(zhì)粒，注入到大腸桿菌中，這里的質(zhì)?？梢允菑牟《局刑崛?，但更安全有效的方法是根據(jù)發(fā)表的核酸序列優(yōu)化設(shè)計直接連接到質(zhì)粒上，避免跟病毒直接接觸；Step2：在溫暖適宜的條件下，大量繁殖生長攜帶了質(zhì)粒的大腸桿菌；Step3：將上述生長繁殖的大腸桿菌轉(zhuǎn)移至體積更大的營養(yǎng)液里，適宜條件下存放發(fā)酵，使其復(fù)制億萬級別的質(zhì)粒；Step4：發(fā)酵結(jié)束后，加入酶或者其他化學(xué)物質(zhì)分解大腸桿菌細(xì)胞壁，收集并純化質(zhì)粒；Step5：檢測上述的質(zhì)粒，確保質(zhì)粒攜帶的基因

初代測序技術(shù)分類及原理2023/02/08: 1977年Sanger和Gilbert分別提出雙脫氧鏈終止法和化學(xué)降解法測序法，標(biāo)志著初代測序技術(shù)的誕生。初代測序技術(shù)分類Maxam-Gilbert化學(xué)降解法測序1.測序原理：先對DNA片段的5'或3'端進(jìn)行放射性標(biāo)記，再采用特異性化學(xué)試劑修飾和裂解特定的堿基位點(diǎn)，從而得到一系列有共同放射起點(diǎn)但長度不一的DNA片段混合物，通過對此混合物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳即可從放射自顯影片直接讀出DNA堿基序列。2.堿基序列的識讀：聚丙烯酰胺凝膠電泳可以將DNA片段混合物按片段大小分開，片段越小越接近凝膠底部

常見生物樣本的存儲和運(yùn)輸條件匯總2023/02/08: 常見生物樣本的存儲和運(yùn)輸條件匯總生物樣本是醫(yī)學(xué)研究的重要資源，其質(zhì)量在很大程度上決定著臨床結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。目前生物樣本及其提取產(chǎn)物主要有深低溫和常溫兩大類保存方式，針對不同科研的需求，更多的樣本保存方式也相繼問世，本文將對常用的樣本保存方式及運(yùn)輸條件進(jìn)行小結(jié)，可以收藏保存?zhèn)溆谩颖緝Υ鏃l件1.-196℃、-150℃深低溫凍存超低溫凍存是理想的樣本保存方法，目前液氮（-196℃）是靠譜的樣本保存方法，然而由于樣本浸沒在液氮中，游離的組織碎片可能帶來交叉污染的潛在風(fēng)險，因此催生了氣相液氮（-1

下游生物技術(shù)的一般工藝流程2023/02/08: 下游生物技術(shù)的一般工藝流程人們通常把工業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)過程比作河流，通常稱微生物育種技術(shù)為上游技術(shù)，稱發(fā)酵技術(shù)為生物反應(yīng)工程，而發(fā)酵液的產(chǎn)物分離到產(chǎn)品的制作技術(shù)稱為下游技術(shù)。由于工業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)品眾多，原料廣泛，產(chǎn)品性質(zhì)多樣，用途各異，因而分離、提取、精制的技術(shù)，生產(chǎn)工藝及相關(guān)裝備也是多種多樣的。根據(jù)不同的對象，可采用在生物工業(yè)中行之有效的化工單元操作技術(shù)，也可采用生物工業(yè)中*的下游新技術(shù)。某一具體產(chǎn)品的分離提取工藝還與下列情況有關(guān)：是胞內(nèi)產(chǎn)物還是胞外產(chǎn)物；（2）原料中產(chǎn)物和主要雜質(zhì)濃度；（3

免疫球蛋白的五大種類2023/02/08: 免疫球蛋白的五大種類免疫球蛋白是一組具有抗體活性的球蛋白，存在于血清、體液、外分泌液和一些細(xì)胞膜上，免疫球蛋白一般?？s寫為Ig，通常可以分為五類，即IgA、IgG、IgM、IgD、IgE，各自具有不同的免疫學(xué)功能。這些免疫球蛋白由B細(xì)胞分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒，其廣泛存在于人體血液中，及B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面，臨床上常用的是測定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM三項。免疫球蛋白對于抵抗外來入侵的病原體或者異物等外來性的抗原，有非常重要的作用。IgMIgM對發(fā)現(xiàn)早期感染意義非常

生物反應(yīng)器培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)的區(qū)別2023/02/07: 生物反應(yīng)器培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)的區(qū)別使用搖瓶在二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，是細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法。隨著現(xiàn)代生物科學(xué)研究發(fā)展進(jìn)步，使用生物反應(yīng)器進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)也變得越來越普遍，生物反應(yīng)器的應(yīng)用逐漸滿足小規(guī)模半生產(chǎn)能力的需求。同樣是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，什么情況下使用搖瓶培養(yǎng)？什么情況下使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)呢？與搖瓶培養(yǎng)相比生物反應(yīng)器有哪些優(yōu)勢呢？下面小編就總結(jié)一下從搖瓶轉(zhuǎn)向生物反應(yīng)器培養(yǎng)的5個理由：一、生物反應(yīng)器培養(yǎng)可獲得更高的收益率這是從搖瓶轉(zhuǎn)向生物反應(yīng)器的主要原因之一—您通常可以在更短的時間內(nèi)獲得更多目的產(chǎn)物。

超凈工作臺和生物安全柜的區(qū)別2023/02/06: 很多從業(yè)者對超凈工作臺和生物安全柜之間的區(qū)別不了解，認(rèn)為這兩者用途差不多。其實這是有很多誤區(qū)的，超凈工作臺和生物安全柜還是有很多區(qū)別的，首先我們從原理上對兩者之間進(jìn)行一個定義。原理超凈工作臺的工作原理是將通過高效過濾器的凈化空氣向下吹或水平過工作區(qū)，用來保護(hù)樣本，由于工作區(qū)是正壓區(qū)，氣流通過操作窗口外溢，只保護(hù)樣本，而對操作人員和環(huán)境不提供保護(hù)，如果操作含有任何已知或潛在致病氣溶膠，都會給操作人員帶來極大隱患。生物安全柜是一種負(fù)壓凈化工作臺，可以防止操作者和環(huán)境暴露于實驗室過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠

核酸提取試劑盒的工作原理2023/02/06: 核酸提取試劑盒的工作原理子生物學(xué)實驗中qPCR、分子克隆、下一代測序等都需要進(jìn)行DNA提取。如今，大多數(shù)實驗室都使用商業(yè)DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質(zhì)量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA），在這里需要先了解一下DNA提取試劑盒的工作原理。核酸提取試劑盒的工作原理離心柱包含一種硅膠樹脂，可根據(jù)鹽條件和受提取方法影響的其他因素選擇性地結(jié)合DNA和RNA。這些DNA提取試劑盒使整個過程比舊的DNA分離方法更容易、更快。但是，使用套件的缺點(diǎn)是，如果您不了解套件的黑

DNA 提取實驗中的常見問題解析2023/02/06: 分子生物中RNA和DNA提取會常常遇到一些問題，下面小編就RNA和DNA提取實驗中的通常遇到的幾個問題進(jìn)行解析。1.提取產(chǎn)量低如果您遇到的DNA/RNA產(chǎn)量低于您對樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個裂解問題。未裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100%200標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。2.提取低純度如果提取的DNA

生物實驗室操作技術(shù)規(guī)范2023/02/06: 病原微生物實驗操作規(guī)范病原微生物接種的操作規(guī)范：做到以下4點(diǎn)能較大限度地減少接種時氣溶膠的產(chǎn)生。1.打開菌種管時，將安瓿管頸部燒熱，用冷的濕棉球使之突然破裂，才可以大大減小溶膠的產(chǎn)生。2.劃板時，瓊脂平板要選用表面光滑的；接種環(huán)應(yīng)用彈性小的金屬絲制作，絲桿要短，環(huán)不宜過大，劃板動作要輕。3.接完種后，蘸有菌液的接種環(huán)應(yīng)在含有消毒液的毛巾上吸干后再放到火焰上灼燒到紅。4.混勻微生物懸液的時候，旋轉(zhuǎn)式搖動，不能左右搖動；搖動時動作輕柔不要使懸液弄濕試管塞。生物樣本移液操作規(guī)范生物樣品的移液操作規(guī)范：

生命科學(xué)研究中常用的幾種實驗方法2023/02/06: 生命科學(xué)研究時生物學(xué)的分支，下面介紹幾個關(guān)于生命科學(xué)常用的幾種實驗方法：一、BCA法測蛋白質(zhì)濃度實驗原理：BCA(bicinchoninicacid，二辛可酸)法測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應(yīng)使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm有強(qiáng)烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測定。二、免疫組化原理:免疫組織化學(xué)，即免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理一-抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性

CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測的方法2023/02/03: CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測的方法CCK-8法是細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性檢測常用的一種檢測方法，其具體操作方法如下：1.制備細(xì)胞懸液：選取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞制作細(xì)胞懸液，并計數(shù)。2.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。3.將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃，5%CO2）12-24小時，使細(xì)胞達(dá)到指數(shù)期（培養(yǎng)時間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異）。4.吸出各孔培養(yǎng)基，向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測藥物進(jìn)行干預(yù)。（實驗組加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基，空白組加入不含藥物培養(yǎng)基

實時熒光定量 PCR技術(shù)2023/02/03: 實時熒光定量PCR，簡稱RT-QPCR,屬于Q-PCR的一種，目前該技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，如：擴(kuò)增特異性分析、基因定量分析、基因分型、SNP分析等。熒光定量PCR常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBRGreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法。SYBRGreenI是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的熒光染料，可與所有的各種序列的雙鏈DNA分子結(jié)合。在游離狀態(tài)下，SYBRGreenI發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合，嵌入至dsDNA，熒光大大增強(qiáng)。因此，S

如何選擇合適的細(xì)胞凋亡試劑盒2023/02/03: 細(xì)胞調(diào)亡是細(xì)胞主動死亡的過程，并出現(xiàn)一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達(dá)和特定的生物大分子合成等。流式細(xì)胞儀可以對不同細(xì)胞凋亡的過程進(jìn)行定性和定量檢測，通過檢測細(xì)胞膜完整性來反應(yīng)細(xì)胞凋亡是常用的流式檢測細(xì)胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測早期凋亡細(xì)胞：AnnexinV可以結(jié)合細(xì)胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，不會被檢測到，凋亡時外翻到細(xì)胞膜外表面，可以被檢測到。②用PI或者7AAD檢測晚期凋亡細(xì)胞：早期凋

CCK-8細(xì)胞活性檢測實驗步驟2023/02/03: CCK-8細(xì)胞活性檢測實驗步驟CCK-8實驗可用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測。使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，可間接性反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)量。使用CCK-8試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活性檢測是一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8細(xì)胞活性檢測實驗步驟：一、實驗前準(zhǔn)備：酒精燈、移液槍、酶標(biāo)儀（帶有450nm濾光片）、96孔培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱、CCK-8、細(xì)胞計數(shù)板、PBS等。二、繪制曲線1.制備細(xì)胞懸液：選取生

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