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CHO細胞外泌體的分離和表征2023/02/03

CHO細胞外泌體的分離和表征CHO細胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。一、細胞培養(yǎng)1.培養(yǎng)基與細胞細胞可使用CHO系中的CHO-S細胞。培養(yǎng)基使用CD-CHO培養(yǎng)基（ThermoFisher）。在培養(yǎng)基中添加8mML-谷氨酰胺利于CH

如何選購合適的PCR耗材2023/02/02

如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質(zhì)一般為聚丙烯PP材質(zhì)，具有高品質(zhì)、高純度、高透明的特點，一般都在潔凈空間生產(chǎn)加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢，為什么需要環(huán)境潔凈？因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化）。這里強調(diào)一下耗材質(zhì)量（是否干凈）的重要性。PCR耗材

實時定量PCR技術(shù)中常見問題匯總2023/02/02

實時定量PCR技術(shù)中常見問題匯總實時定量PCR技術(shù)（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過特定數(shù)學(xué)原理對未知模板進行定量分析的方法。它是一項臨床上非常成熟的技術(shù)，目前在分子生物學(xué)領(lǐng)域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)”——核酸檢測就是通過qPCR原理進行的。那么拿到一個樣本，需要經(jīng)過以下多項操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中任何一個步驟操作失誤

使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)2023/02/02

使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)使用傳統(tǒng)體外方法生產(chǎn)的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應(yīng)器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時間的方式同時培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續(xù)生產(chǎn)大量用于下游實驗的EV。一、生物反應(yīng)器接種、適應(yīng)和維護培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(Gibco)、2%C

細胞培養(yǎng)常見問題匯總2023/02/02

細胞培養(yǎng)常見問題匯總1冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之

層析工藝放大需要遵循的原則2023/02/01

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數(shù)和洗脫樣品CV數(shù)，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實際的應(yīng)用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設(shè)備供應(yīng)商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當(dāng)層析柱直徑超過30cm時，由

熒光定量PCR實驗中PCR儀器選購技巧2023/01/31

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是無數(shù)研究和測試實驗室的主要技術(shù)，涉及的領(lǐng)域包括生物醫(yī)學(xué)、基因編輯、食品微生物學(xué)測試等。熒光定量PCR技術(shù)使用熱循環(huán)來促進一系列反應(yīng)，在這些反應(yīng)中，DNA樣本會快速、呈指數(shù)地復(fù)制，從而產(chǎn)生數(shù)百萬或數(shù)十億個序列拷貝。購買PCR儀器時，重要的是要考慮您的應(yīng)用的最終目標(biāo)、熱循環(huán)設(shè)備的準(zhǔn)確性和效率以及儀器的容量和靈活性。本文概述了PCR儀器可用的不同選項和功能，以幫助您選購合適的PCR儀。1.PCR與qPCR與dPCR雖然所有PCR系統(tǒng)都使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)復(fù)制DNA，但不同的系

應(yīng)用差速離心法分離外泌體的原理2023/01/31

外泌體是一種小的(40-100nm)細胞外膜囊泡，目前進行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機制各不相同具體取決于細胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通?？梢员鎰e出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細胞的細胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時稱為“微泡”，是由質(zhì)

影響細胞培養(yǎng)的環(huán)境因素有哪些2023/01/31

細胞培養(yǎng)環(huán)境主要通過CO2培養(yǎng)箱、震蕩培養(yǎng)箱（即溫度、濕度、O2和CO2張力）和基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基及其補充劑來實現(xiàn)。這不僅包括碳水化合物、維生素、氨基酸、礦物質(zhì)、生長因子、激素等營養(yǎng)素的供應(yīng)，還包括控制培養(yǎng)物pH值和細胞滲透壓等理化特性的成分。此外，固體或半固體生長基質(zhì)和細胞密度分別允許細胞-基質(zhì)錨定和細胞-細胞相互作用，這進一步控制了生理相關(guān)微環(huán)境的模擬。為滿足特定細胞類型的要求，市場上已有多種細胞培養(yǎng)基組合物，并且可以根據(jù)它們補充血清的水平進行分類。胎牛血清(FBS)形式的血清通常會添加到已經(jīng)含

外泌體制造需要哪些實驗室設(shè)備2023/01/31

外泌體是蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸的天然載體，在細胞間通訊中起著至關(guān)重要的作用。外泌體包含各種膜蛋白，例如內(nèi)體相關(guān)蛋白（Alix、Tsg101和Rab蛋白）、四跨膜蛋白（CD63、CD81、CD82、CD53和CD37）和脂筏相關(guān)蛋白（糖基磷脂酰肌醇和flotillin）。隨著近年來生物技術(shù)、實驗室設(shè)備的不斷發(fā)展，外泌體有著廣泛的應(yīng)用前景，包括藥物發(fā)現(xiàn)、配體篩選和靶向藥物遞送。進而即用型、高質(zhì)量的功能性外泌體的需求也越來越顯明，這種工業(yè)外泌體生產(chǎn)需要通過大規(guī)模外泌體制備和純化來實現(xiàn)。外泌體制備過程主要分

生物實驗室玻璃儀器的洗滌方法2023/01/31

生物實驗室玻璃儀器的洗滌方法玻璃儀器是實驗室常用的實驗器皿，生物實驗室玻璃儀器的正確洗滌方法有哪些呢？實驗室器皿清晰時有哪些需要注意的呢？1.潔凈劑及其使用范圍常用的潔凈劑有肥皂、合成洗滌劑（如洗衣粉）、洗液（清潔液）、有機溶劑等。肥皂、合成洗滌劑等一般用于可以用毛刷直接刷洗的儀器，如燒瓶、燒杯、試劑瓶等非計量及非光學(xué)要求的玻璃儀器。肥皂、合成洗滌劑也可用于滴定管、移液管、量瓶等計量玻璃儀器的洗滌，但不能用毛刷刷洗。洗液多用于不能用毛刷刷洗的玻璃儀器，如滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗

酶聯(lián)免疫吸附試驗類型2023/01/29

酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)被稱為免疫測定金標(biāo)準(zhǔn)。是一種免疫學(xué)測定方法，這種測試一般較為靈敏，通常用于檢測和量化物質(zhì)，包括抗體、抗原、蛋白質(zhì)、糖蛋白和激素。酶聯(lián)免疫吸附試驗也常用于診斷HIV感染、妊娠試驗和血型鑒定等。堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶和β-半乳糖苷酶是ELISA中很少使用的酶。ELISA在原理上類似于放射免疫測定(RIA)，但更安全且成本較低。ELISA有助于抗原或抗體的定性（存在或不存在）和定量（濃度）測量。當(dāng)前使用的酶聯(lián)免疫分析技術(shù)主要有以下幾種：1.直接ELISA直接和間接EL

外泌體衍生物的應(yīng)用2023/01/29

外泌體衍生物的應(yīng)用近期市場研究報告預(yù)測到2030年全球外泌體研究市場規(guī)模和份額需求將達到18.96億美元，說明外泌體具有巨大的市場潛力和行業(yè)認(rèn)可度。由于外泌體的體積較小一般為(30–100nm)，所以外泌體的準(zhǔn)確定量和表征在技術(shù)上是具有挑戰(zhàn)性的人。目前，已經(jīng)開發(fā)并應(yīng)用了許多技術(shù)來克服這些挑戰(zhàn)。納米粒子跟蹤分析(NanoSight)技術(shù)就是用于外泌體大小和定量主要方法之一。比如：NanocoulterⅠ納米粒度儀采用了新一代電學(xué)原理可以同時進行納米粒子或外泌體的單顆粒檢測，顆粒粒徑大小測量、濃度測

外泌體的載藥方法和給藥途徑2023/01/12

藥物傳遞系統(tǒng)DDS：是將脂質(zhì)體、微囊、微球、微乳、納米囊、納米球、外泌體等作為藥物載體將藥物通過不同的給藥方式，直接輸送到病灶部位的一種新型醫(yī)療方式。將藥物加載到外泌體在進行藥物傳遞系統(tǒng)DDS設(shè)計時，其中一個重要的環(huán)節(jié)就是載藥方法。由于外泌體具有生物相容性、穩(wěn)定性和腫瘤靶向性，隨著外泌體技術(shù)研究的不斷發(fā)展使它們成為有前景的藥物載體。外泌體的構(gòu)建類似于雙膜脂質(zhì)體，并且藥物裝載方法也類似。但在藥物傳遞系統(tǒng)DDS設(shè)計前需要根據(jù)藥物和外泌體特性仔細選擇。外泌體可以通過被動或主動方法裝載多種藥物、大分子和

外泌體的結(jié)構(gòu)功能和外泌體分離方法2023/01/11

外泌體通常被認(rèn)為是細胞間信號分子，包含許多蛋白質(zhì)、核酸、細胞因子、轉(zhuǎn)錄因子和其他細胞來源的顆粒。外泌體不僅可以向局部環(huán)境傳遞信息，還可以向距離很遠的細胞和組織傳遞信息。這可能作為一般信號和通信通路，但也可能參與致癌基因擴散和惡性腫瘤進一步惡化。迄今為止，已證實外泌體存在于體液中，例如羊水、血清、母乳、附睪液、唾液、尿液、腹水和胸腔積液、支氣管肺泡灌洗液、滑液和體外細胞培養(yǎng)上清液中。細胞排出的外泌體也可作為去除不必要的蛋白質(zhì)和核酸的一種方式，例如，在細胞成熟（網(wǎng)織紅細胞）或排泄系統(tǒng)（腎的內(nèi)臟和小管

細胞外泌體來源和外泌體的表征方法2023/01/10

細胞外泌體來源及表征方法細胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過去的20年里，科學(xué)家已經(jīng)從包括正常細胞和癌細胞在內(nèi)的許多細胞類型中分離出外泌體，并且研究了它們對其他細胞的影響。外泌體是由多種大分子組成，例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細胞外泌體具有天然的特定細胞靶向特性，通常被設(shè)計用于靶向大分子（DNA和RNA）和藥物遞送系統(tǒng)（多柔比星、紫杉醇和紫杉醇）。目前常用細胞外泌體的分離方法主要是超速離心法、密度梯度離心法、超濾分離法、基于聚合物的沉淀法、親和沉淀分離法、免疫磁珠法和色譜法等一、

制藥廠消毒和滅菌措施2023/01/09

制藥廠消毒和滅菌措施醫(yī)藥工業(yè)潔凈室與其他工業(yè)潔凈室有所不同，特別是無菌生產(chǎn)，不僅要控制空氣中一般的懸浮狀態(tài)的氣溶膠粒子，還要控制活微生物數(shù)，即提供所謂的“無菌”環(huán)境(無菌室)。另一方面，不能認(rèn)為進入潔凈室的空氣無菌了，室內(nèi)各種表面就不沾污細菌了。如果這些地方有營養(yǎng)源，細菌繁殖的可能性就存在。在潔凈室中人體是主要菌源之一，不僅皮膚帶有細菌(其中約l％為病原性的)，人通過呼吸、講話也會散布細菌，所以在潔凈室中除了戴口罩外，制藥廠潔凈室消毒和滅菌也很重要。按理說，在空氣凈化系統(tǒng)中，經(jīng)高效過濾器過濾的空

人原代細胞的解凍方法2023/01/09

人原代細胞的解凍方法人原代細胞是直接從組織中分離出來的細胞，包括外周血、臍帶血和骨髓。這些細胞因其在生物過程、疾病進展和藥物開發(fā)研究以及包括基于體外細胞的分析或創(chuàng)建異種移植或人源化小鼠模型在內(nèi)的應(yīng)用中的重要性而日益受到認(rèn)可。如果不需要立即使用，新鮮的原代細胞通常會低溫保存（即冷凍），以便在液氮中長期儲存。處理新鮮樣品資源有限的研究人員也可以購買冷凍的即用型原代細胞，包括單核細胞(MNC)、純化的免疫細胞或造血干細胞。解凍冷凍細胞時，正確的技術(shù)和處理可確保細胞在下游應(yīng)用中的活力、恢復(fù)和功能。如何解

細胞培養(yǎng)需要注意什么2023/01/09

細胞培養(yǎng)需要注意什么細胞培養(yǎng)需要注意什么細胞培養(yǎng)是細胞和分子生物學(xué)中使用的關(guān)鍵工具。它可以對細胞生理學(xué)和細胞生物化學(xué)進行建模。此外，細胞培養(yǎng)使研究人員能夠確定藥物和有毒化合物對細胞反應(yīng)的影響。那么怎么培養(yǎng)出一批好的細胞呢？細胞培養(yǎng)需要注意什么？細胞培養(yǎng)需要注意以下幾點：一、細胞培養(yǎng)環(huán)境不同的細胞，培養(yǎng)環(huán)境是不同的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞，比如：內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一

瑞寧移液器檢定規(guī)程2023/01/09

瑞寧移液器檢定規(guī)程移液器檢定規(guī)程1.移液器檢定規(guī)程適用范圍：本規(guī)程適用于移液器的檢定、后續(xù)檢定和使用中的檢驗。2引用文獻本規(guī)程引用下列文獻：GB6682—1992分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。使用本規(guī)程時應(yīng)注意使用上述引用文獻現(xiàn)行有效版本。3術(shù)語和計量單位3.1移液器具有一定量程范圍，可將液體從容器內(nèi)吸出，移入另一容器內(nèi)的計量器具。(加液器、加樣槍、吸液器等統(tǒng)稱為移液器)。3.2可調(diào)移液器可調(diào)節(jié)容量值的移液器。3.3定量移液器具有單一容量值的移液器。3.4吸液嘴安裝在移液器本體下端的，用于吸入、