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細胞培養轉瓶和細胞工廠有哪些不同2023/04/27

近幾十年以來，隨著生命科技的快速發展，通過從動物組織中提取細胞在體外大規模培養用以表達單克隆抗體、新藥開發等已成為普遍的技術。細胞的規模化擴培成為新的細胞培養需求，目前細胞擴增手段主要有：轉瓶培養、細胞工廠和生物反應器擴培三種方式。轉瓶培養所面臨的挑戰：轉瓶培養雖然投資少、結構簡單、技術成熟、擴增只需加轉瓶數量等優點，但是占地空間大、勞動強度大、產率低、細胞生長密度低、瓶間差異較難控制等，難以產業化或規模化生產。生物反應器培養雖然可以大大提高細胞產率但是剪切力會降低細胞的活率，并且微載體與細胞分

基因定點突變技術2023/04/27

體外定點突變技術是當前生物學各領域研究中的一種重要實驗手段，是改造、優化基因的便捷方案，是探索啟動子調節位點的有效手段，也是研究蛋白質結構和功能之間的復雜關系的有力工具。蛋白質的結構決定其功能，二者之間的關系是蛋白質組研究的重點之一。對某個已知基因的特定堿基進行定點改變、缺失或者插入，可以改變對應的氨基酸序列和蛋白質結構，對突變基因的表達產物進行研究有助于人類了解蛋白質結構和功能的關系，探討蛋白質的結構/結構域。CRISPR-Cas9系統的靶向雙鏈斷裂（DSB），基因組通常通過非同源端連接（NH

藥廠的清潔和消毒措施2023/04/27

對于制藥企業而言，當某一產品生產完畢后，總會有一些微生物和少許原輔料殘留于設備中，在溫度和濕度達到一定程度時，微生物能夠與原輔料中殘留有機物出現無法物化反應，通過大量繁殖能夠形成不同類型代謝物，這些代謝物會從一定程度上影響藥物藥效甚至會產生毒副作用，從而使制藥企業每當生產一段時間或者更換產品后會存在產品質量問題，因此無論維修設備或設備空閑一段時間，需要實現設備清潔工作。對于制藥企業來說，清潔主要針對設備中殘留的微生物或者各種代謝物，其總量在不影響藥品規定的質量、藥效及安全性。清潔管理的重要性我國

CRISPR/Cas9 基因編輯和NGS驗證2023/04/26

CRISPR/Cas9基因編輯技術需要通過下一代測序(NGS)來驗證，能夠在核苷酸水平分辨率下進行大規模評估基因編輯的準確性和可靠性。高效、可自動化和可擴展的CIRCLE-seq是一種體外NGS測定，可以對CRISPR介導的切割進行靈敏的脫靶檢測。CRISPR/Cas9基因編輯技術CRISPR代表成簇規律間隔的短回文重復序列。這些重復的DNA片段最初來源于病毒病原體，并作為模板將CRISPR相關蛋白9(Cas9)核酸內切酶引導至新入侵的病毒。當Cas9遇到同源病毒序列時，它會產生近端雙鏈斷裂(D

科研實驗常用人肝癌細胞株的區別2023/04/25

肝細胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是近年來發病率急劇上升的惡性腫瘤之一。肝癌細胞系廣泛應用于各類肝癌的研究。肝癌細胞系的基因組與健康人細胞系的基因組不同。常見的人肝癌細胞系有PLC、Huh7、Huh7.5、Hep3B、HepG2、SMMC-7721、MHCC97-H、MHCC9-L等，每一種細胞系都有自己的特點，但是，SMMC-7721,、MHCC9-L已經退出實驗舞臺，由于它們具有與原代肝癌細胞相似的生物學特性，無生物學改變、特性穩定、無限制傳代，為肝癌研究提供

HE染色實驗中常見問題及應對措施2023/04/25

HE染色實驗常見問題及解決方案HE染色是石蠟切片技術中常用的染色方法之一，簡稱為蘇木精-伊紅染色法。該方法使用堿性的蘇木精染液將細胞核內的染色質和胞質內的核酸染成紫藍色，同時使用酸性染料伊紅將細胞質和細胞外基質中的成分染成紅色。1、切片出現白色斑點原因：(1)烘片溫度過低，導致玻片未干透；(2)切片在二甲苯中停留時間過短；(3)二甲苯使用時間過長，導致脫蠟不效果不好。對策：若玻片未干透，先用無水乙醇去除水分，再重新脫蠟。若斑點是由于停留時間過短或使用時間過長造成的，則需重新操作，延長停留時間或更

穩定細胞株的篩選步驟2023/04/24

穩定細胞株是一種常用于基因表達、藥物篩選和蛋白質表達等領域的工具。但是，穩定細胞株的篩選需要經過一系列的步驟和實驗，下面介紹一下穩定細胞株篩選的兩種方法和穩定細胞株的篩選簡要步驟：一、質粒轉染法先把質粒整合到染色體上后，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩定細胞株。1、篩選濃度測定，以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；2、進行細胞接種，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋；3、

紫外可見分光光度計操作標準SOP2023/04/21

紫外可見分光光度計操作維護標準SOP1.0適用范圍：本規程適用于制藥行業質量控制實驗室安裝的紫外可見分光光度計操作維護和清潔標準2.0職責：QC員：負責儀器的操作和維護。QC負責人/經理：負責儀器操作標準程序的問責制和有效實施。3.0定義-分光光度計：測量樣品在固定波長或較寬波長掃描范圍內的吸光度，并在單色光束通過樣品時產生光譜的裝置。4.0紫外可見分光光度計操作步驟：4.1操作前確保儀器清潔并校準。打開儀器和與儀器連接的計算機的主電源。4.3接通電源后，分光光度計開始初始化，檢查所有參數的功能

塑料離心管和玻璃離心管選購指南2023/04/21

市場上常見離心管主要分為兩種：即：塑料離心管和玻璃離心管，也有少數是鋼制離心管。那么這些不同材質的離心管有什么區別呢?下面小編就來介紹一下塑料離心管和玻璃離心管的區別。玻璃離心管玻璃離心管是由玻璃制成的，不同廠家可能使用的玻璃成分不同，所以強度上可能會略有差異。我們的普通玻璃試管可以承受的相對離心力(RCF)通常小于3000g，而硼硅玻璃管一般可以承受超過10000g以上的相對離心力。但由于玻璃離心管質量易碎，所以玻璃管一般不用于高速離心機，用得也不多。由于玻璃本身的特性，它具有良好的化學穩定性

細胞凋亡實驗步驟及注意事項2023/04/19

一、實驗目的1、掌屋凋亡細胞的形態特征2、學會用熒光探針對細胞進行雙標記來檢測正常活細胞、凋亡細胞和壞死細胞的方法二、實驗原理細胞死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合，是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態學和生物化學特征。在形態上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質網擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀

慢病毒包裝常見問題匯總2023/04/14

Q:什么是MOI？A:在微生物學中，MOI是病原體(如噬菌體或病毒、細菌等)與感染目標(如細胞)的比率。對于病毒，MOI是病毒顆粒數量與特定空間中存在的目標細胞數量的比率。通常可將某株細胞有80%被感染時所用的病毒顆粒數和細胞數目的比值作為該株細胞的MOI。Q：如何稀釋病毒？A：您可使用完培、PBS液等將病毒稀釋到需要的滴度。如將滴度為5x109TU/ml的病毒稀釋到1x109TU/ml，則需取20µl病毒液加入到80µl的完培中。Q：用于病毒感染的細胞接種量是多少？A:根據細胞增殖的速度調整細

慢病毒包裝步驟2023/04/13

1.重組慢病毒的制備Day1:匯合度90%的10cmdishsHEK293T細胞（~6×107/dish）按1：1比例傳代至15cmdishs，第二天細胞匯合度達到90%-95%（~1.5×108/dish），培養基為Gibico高糖DMEM培養基（含10%FBS）。Day2:轉染前2-3個小時更換培養基（含10%FBS)；2)按照以下比例配制轉染試劑：Mix1體積μlMix2量DMEM（無FBS）1000μlDMEM（無FBS）1000μl目的基因質粒25μgVGF190μl（1μg/μl）P

病毒實驗原理和慢病毒包裝系統介紹2023/04/13

慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型)，再往里依次為基質蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒實驗原理慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。但區別于一般的逆轉錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。重組慢病毒載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎發展起來的工具載體，其毒性基因已經被剔除

攪拌罐生物反應器培養貼壁細胞如何選擇微載體2023/04/11

微載體能夠在攪拌罐生物反應器中培養貼壁細胞。然而，不存在用于微載體選擇的穩健、可轉移的方法，研究提供很少或沒有解釋為什么使用微載體的原因。我們系統地評估了來自三個供體的用于人骨髓來源的MSC(hBM-MSCs)擴增的13種微載體，以建立一種可重現和可轉移的微載體選擇方法。單層研究證明了輸入細胞系在生長動力學和代謝物通量方面的變異性。與hBM-MSC2和hBM-MSC3相比，HBM-MSC1在三個傳代中經歷了更多的累積群體倍增。在100mL轉瓶中，攪拌條件明顯優于靜態條件，與供體無關，并且相對微載

細胞培養過程中細胞質控方案2023/04/07

正如人有喜怒哀樂，細胞也是如此，細胞的活力和狀態是不斷變化的，而非一成不變的。在細胞體外培養的過程中，離開機體保護的細胞是很脆弱的，在陌生的生長環境下即便是培養條件的輕微改變，也可能對細胞產生無法預估的影響。在原代細胞培養過程中，即使保持培養條件一致，在傳代過程中，細胞的存活質量也是逐漸下降的。以人臍靜脈內皮細胞（HUVEC細胞）為例，HUVEC細胞是研究內皮細胞功能的經典體外細胞模型。在心血管疾病的研究中，主要用于研究內皮細胞功能改變或損傷后其衍生細胞因子對血壓的影響；在腫瘤研究中，主要用于實

生育研究新途徑-科學家利用 2 只雄性細胞制造小鼠2023/04/06

近期，科學家們從兩只雄性小鼠中培育出幼鼠。這提高了將同樣的技術用于人類的可能性——盡管專家警告說，很少有小鼠胚胎發育成活的小鼠幼崽，而且沒有人知道它是否適用于人類。盡管如此，“這是一個非常聰明的策略，”加州大學舊金山分校的干細胞和生殖專家DianaLaird說，她沒有參與這項研究。“這是干細胞和生殖生物學的重要一步。””科學家們在周三發表在《自然》雜志上的一項研究中描述了他們的工作。首先，他們從雄性小鼠的尾巴上提取皮膚細胞，并將其轉化為“誘導性多能干細胞”，這些細胞可以發育成許多不同類型的細胞或

細胞培養干貨-干細胞培養基和培養基添加劑2023/04/04

30多年來，生物產業一直在為許多細胞類型開發專門的細胞培養基，包括原代細胞和干細胞。細胞培養是生命科學中常見和復雜的技術之一，培養基本身是維持培養中健康、增殖的干細胞的關鍵因素。所有干細胞培養基的基本成分主要包含：基礎培養基、緩沖系統、谷氨酰胺、血清（或血清替代品）、特定生長因子以及其他補充劑等。一、基礎培養基經典基礎培養基（DMEM、MEM、RPMI等）是化學成分明確的配方，每種配方都是為支持特定的細胞系或培養條件而開發的。許多基礎培養基起初是使用小鼠成纖維細胞、HeLa或CHO細胞系開發的，

hTERT 永生化腎上皮細胞培養方法2023/04/03

血管平滑肌脂肪瘤是腎臟的良性腫瘤，起源于假定的血管周圍上皮樣細胞。這些細胞可能會分化成具有黑素細胞、平滑肌或脂肪細胞特征的細胞。然而，血管平滑肌脂肪瘤的研究因缺乏成熟的血管平滑肌脂肪瘤衍生細胞系和良好的動物模型而受到限制。hTERT永生化腎上皮細胞來源于血管平滑肌脂肪瘤，因此研究人員現在可以在體外利用這些細胞的原代細胞特性和延長的壽命。UMB1949細胞系表達NG2和L1，并且在塊蛋白(Tsc2)的外顯子33中有一個確定的5bp缺失，在塊蛋白（和/或錯構蛋白）中有突變。因此，該細胞系可用于研究結

為什么要進行進行細胞系STR鑒定2023/04/03

據統計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識，只因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果……，這將浪費大量時間、精力和金錢。世人皆知，細胞身嬌體貴難養活，養好細胞實屬不易。而這其中煩的是污染、怕的是掉包。因為盡管研究僧們有方法把一切污染的源頭扼殺在搖籃之內，卻沒有火眼金睛辨別已經換了馬甲的錯誤細胞。因而細胞一旦被李代桃僵，再資深的科研者都會陰溝里翻船，所以細胞鑒定顯得尤為重要。為什么要進行細胞系鑒定？進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫藥的研究都

使用ipsc誘導多能干細胞生成類器官技術簡介2023/03/31

類器官是復雜的3-D器官樣微組織，由多種分化的細胞類型組成，其結構組織類似于體內發現的細胞，具有中央腔和其他類似體內的結構特征。從ipsc誘導多能干細胞產生的類器官已被描述用于胃、腸、肺、大腦、腎、肝臟等各種組織，這些類器官是其他體外模型的有吸引力的替代品；這些微組織比2-D細胞培養或簡單的3-D球體聚集體更好地概括了體內組織表型，但沒有與器官外植體或組織切片相關的挑戰，例如培養壽命有限。事實上，類器官保留了許多細胞培養的典型有利特征，例如維持穩定培養數月的能力，以及冷凍保存和恢復培養物的能力。